【题目】内皮素(ET)自1988年发现以来,一直是人们研究的热点。它不仅存在于血管内皮,也广泛存在于各种组织和细胞中,是调节心血管功能的重要因子,对维持基础血管张力与心血管系统稳态重要作用。内皮素主要通过与靶细胞膜上的内皮素受体结合而发挥生物学效应。ETA是内皮素的主要受体,科研人员试图通过构建表达载体,实现ETA基因在细胞中高效表达,其过程如图所示,图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因,限制酶Apa的识别序列为,限制酶Xho的识别序列为。请据图分析回答下列问题

1)进行过程时,需要加入缓冲液、引物、dNTP 酶等。完成过程①②③的目的是

2)过程中,限制酶XhoI切割DNA,使磷酸二酯键断开,形成的黏性末端是 。用两种限制酶切割获得不同的黏性末端,其主要目的是

3)构建的重组表达载体,目的基因上游的启动子的作用是 ,除图示结构外,完整的基因表达载体还应具有 等结构(至少写出两个结构)。

4)过程CaCl2预先处理大肠杆菌,使其成为容易吸收外界DNA 细胞。

5)利用SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因,目的是

6)人皮肤黑色素细胞上有内皮素的特异受体,内皮素与黑色素细胞膜上的受体结合后,会刺激黑色素细胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性,从而使黑色素急剧增加。美容时可以利用注射ETA达到美白祛斑效果,试解释原因

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