【题目】单克隆抗体在诊断和治疗中具有广泛的应用。已知一般细胞的DNA合成途径有起始合成途径和中间合成途径两种,氨基蝶呤(A)可以阻碍起始合成途经,次黄嘌呤(H)及胸腺嘧啶核苷(T)则是中间合成途径所必需的物质。骨髓瘤细胞只有起始合成途径。在HAT培养基中含有次黄嘌呤(H)、氨基蝶呤(A)及胸腺嘧啶核苷(T)。下面是制备单克隆抗体的基本步骤:

步骤1:对小鼠多次注射特定抗原,制备淋巴细胞。

步骤2:细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养。最后一次免疫后第3天制备脾细胞悬液;筛选出途径缺失的骨髓瘤细胞,于对数生长期(又称指数生长期,即细胞以指数形式增加)制备骨髓瘤细胞悬液;取适量的脾细胞与骨髓瘤细胞进行混合,对它们进行诱导融合处理;用HAT培养基对处理后的细胞进行培养。

步骤3:二次筛选。

步骤4:大规模培养杂交瘤细胞,批量生产单克隆抗体。

回答下列问题:

1)步骤1中对小鼠多次注射特定抗原的目的是________________________;实验所需淋巴细胞可由________________细胞增殖分化而来。

2)于对数生长期制备骨髓瘤细胞悬液的原因是________________________________;为使HAT培养基上只有杂交瘤细胞可以存活,步骤2中应填________

3)步骤3中二次筛选可通过________________________法进行目的抗体的检测,筛选出________________细胞。

4)在体外对杂交瘤细胞进行克隆化培养时,为维持无菌无毒的环境,应进行的操作是_______________________________________________________________________。实验发现,在杂交瘤细胞的体外培养过程中,加入饲养层细胞比不加的生长要好,可能的原因是________________________________________

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