为解除柑橘黄龙病对柑橘产业的严重影响,美国科学家近日从菠菜中获得了一种能抵抗柑橘黄龙病的蛋白质的基因,并已经成功地进行了一系列培育转基因植株的研究。其过程大致如下,请分析后作答。
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(1)有两种识别切割序列完全不同的限制酶E和F从菠菜基因组DNA上切下目的基因并取代Ti质粒(4.0 kb)上相应的EF区域(0.2 kb)形成重组质粒,该过程还必须用到的酶是 ,形成的重组质粒 填(“能”或“不能”)被E酶切割。
(2)若图中Ti质粒上限制酶G切割位点与E的切割位点距离0.9 kb,限制酶H切割位点距F切割位点0.5 kb,分别用限制酶G和限制酶H酶切两份重组质粒样品,结果如下表。据此可判断目的基因的大小为 k
b;并将目的基因内部的限制酶H切割位点标注在下图中。
G | H |
1.8 kb 3.2 kb | 1.3 kb 3.7 kb |
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(3)在上述培育过程中两次用到农杆菌,它与柑橘细胞相比较,在结构上最主要的区别是 ,导入重组质粒后的农杆菌的作用是 。