受损伤的马铃薯细胞内酚氧化酶(PPO)和底物(酚类物质)直接接触,引起马铃薯的褐变。为探究温度对PPO活性的影响,实验小组进行如下实验。
(1)PPO粗提液的提取
低温下将新鲜马
铃薯用蒸馏水洗净、去皮,取20 g样品放入含50 mL磷酸缓冲液(pH为5.5)的研钵中,同时加入少量石英砂,研磨、离心,上清液即为PPO的粗提液。加缓冲液研磨的目的是 。
(2)不同温度下PPO活性的测定
试管编号 步骤 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
加入PPO粗提液/mL | 2 | — | 2 | — | 2 | — | 2 | — |
加入酚类底物/mL | — | 2 | — | 2 | — | 2 | — | 2 |
反应 | 混合振荡 | 混合振荡 | 混合振荡 | 混合振荡 | ||||
温度预处理(5 min)/℃ | 0 | 15 | 30 | 45 | ||||
保温时间/min | 5 | 5 | 5 | 5 | ||||
记录结果 | + | ++++ | +++ | ++ | ||||
注:反应底物充足;实验结果中“+”越多,褐色越深
①实验步骤顺序有不妥之处,请改正: 。
②实验结果表明:在温度为15 ℃和30 ℃的条件下,PPO具有相同的活性,从酶的特性分析其原因是 。
③为进一步探究PPO最适温度,应在 范围内设置温度梯度。