7.Graves 病(GD)可导致甲状腺功能亢进.研究发现,GD患者甲状腺细胞表面表达大量细胞间粘附分子I(ICAM-1),导致甲状腺肿大.科研人员通过制备单克隆抗体,对治疗GD进行了尝试.
(1)用ICAM-1作为抗原间隔多次免疫若干只小鼠,几周后取这些免疫小鼠的血清,分别加入多孔培养板的不同孔中,多孔培养板中需加入ICAM-1以检测这些小鼠产生的抗体.依据反应结果,选出阳性(或“抗原-抗体”)反应最强的培养孔所对应的小鼠M.
(2)实验用骨髓瘤细胞置于(5%)CO2恒温培养箱中37℃培养,融合前将部分培养细胞置于含HAT的选择培养基中培养,一段时间后培养基中无(填“有”或“无”)骨髓瘤细胞生长,说明培养基符合实验要求.
(3)取小鼠M 的脾脏细胞制备成细胞悬液,与实验用骨髓瘤细胞进行融合,用选择培养基筛选得到具有无限增殖能力的细胞.将获得的上述细胞在多孔培养板上培养,用ICAM-1检测,从中选择大量产生抗ICAM-1抗体的杂交瘤细胞,植入小鼠腹腔中克隆培养,一段时间后从小鼠腹水中提取实验用抗体.
(4)若进一步比较实验用抗体和131I对GD 模型小鼠的治疗作用,可将若干GD 模型小鼠等分为三组,请补充下表中的实验设计.
对照组(A)231I治疗组单克隆抗体治疗组(C)
给模型小鼠腹腔注射0.1mL无菌生理盐水给模型小鼠腹腔注射溶于0.1mL无菌生理盐水的 
6.红豆杉能产生抗癌药物紫杉醇,为了培养产生紫杉醇的柴胡,科研人员将红豆杉(2n=24)与柴胡(2n=12)进行了不对称体细胞杂交.
(1)科研人员剥离红豆杉种子的胚作为外植体接种于经过灭菌处理的培养基上,诱导形成愈伤组织.选用胚作为外植体是因为胚的分化程度低,易于脱分化.
(2)将红豆杉愈伤组织和柴胡愈伤组织用纤维素酶和果胶酶分别处理,各自获得有活力的原生质体.用一定剂量的紫外线照射红豆杉原生质体,破坏部分染色体,与未经紫外线照射的柴胡原生质体用化学诱导剂PEG诱导融合,得到融合细胞.
(3)诱导融合后,科研人员只统计了7组染色体数目不大于24条的细胞,如表所示.
材料融合细胞组号
 1234567
 
染色体数(条)
 
9-11
 
12
 
12-14
 
12-16
 
13
14
 
 
24
①科研人员筛选的目标细胞不包括染色体数目大于24 条的细胞,因为柴胡细胞染色体数为12条,并且红豆杉细胞一个染色体组的染色体数为12条.
②实验时,科研人员判断组号为3、4、5、6的细胞为杂交细胞,并进一步采用PCR方法鉴定这几组细胞.PCR扩增DNA时,需要分别以红豆杉和柴胡的特异DNA序列引物,扩增红豆杉、柴胡和杂交细胞的DNA,观察并比较扩增DNA的电泳结果.
(4)红豆杉和柴胡的亲缘关系较远,两种植物细胞的染色体间排斥较为明显,应在能够高效合成紫杉醇的杂交细胞中选择红豆杉的核基因含量较低的杂交细胞进行培养.
5.白僵菌可感染农业害虫,常作为防治害虫的菌剂.由于白僵菌对除草剂草丁膦敏感且杀死害虫的能力较弱,科研人员对其进行基因工程改造,流程如图所示.

(1)苏云金芽孢杆菌产生的毒蛋白,能有效杀死害虫.已知该基因的全部序列,科研人员通过人工合成(或“化学合成”)法和PCR 技术获得大量毒蛋白基因片段.据图分析,将毒蛋白基因和质粒连接获得重组质粒l 的过程需要用到的工具酶是NcoI、BamHI和DNA连接酶.
(2)重组质粒1和Bar 基因(草丁膦抗性基因)各自用XbaI 酶处理,得到酶切片段.重组质粒l 的酶切片段再用去磷酸化酶处理,使端游离的磷酸基团脱离,目的是防止重组质粒1酶切片段自身连接(或“相互连接”).将未用去磷酸化酶处理的Bar 基因与重组质粒1连接,获得重组质粒2.获得的重组质粒2的是如图中的C.

(3)将重组质粒2与感受态的白僵菌菌液混合进行转化,重组质粒2 在白僵菌细胞内被修复.一段时间后用含有草丁膦的平板培养基进行筛选,获得含有Bar 基因的重组白僵菌.
(4)提取上述重组白僵菌全部mRNA,加入逆转录酶,获得cDNA,再加入毒蛋白基因引物进行PCR 反应,用以检测毒蛋白基因是否完成了转录.
(5)科研人员将重组白僵菌喷涂于植物叶片上,以此饲喂饥饿处理的害虫,记录单位时间内的死亡害虫数,以判断重组白僵菌的杀虫效果.
 0  138306  138314  138320  138324  138330  138332  138336  138342  138344  138350  138356  138360  138362  138366  138372  138374  138380  138384  138386  138390  138392  138396  138398  138400  138401  138402  138404  138405  138406  138408  138410  138414  138416  138420  138422  138426  138432  138434  138440  138444  138446  138450  138456  138462  138464  138470  138474  138476  138482  138486  138492  138500  170175 

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