1.下面是将乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资料,请分析回答下列问题:

资料1:巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母菌,能将甲醇作为其唯一碳源,此时AOX1基因受到诱导而表达【5′AOX1和3′AOX1(TT)分别是基因AOX1的启动子和终止子】.
资料2:巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒,所以科学家改造出了图1所示的pPIC9K质粒用作载体,其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组,将目的基因整合于染色体中以实现表达.
资料3:限制酶切位点
限制酶识别序列及酶切位点
SnaBⅠ
AcrⅡ
SacⅠ
BalⅡ
(1)如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组,应该在HBsAg基因两侧的A和B位置接
上SnaBⅠ、AvrⅡ限制酶识别序列,这样设计的优点是避免质粒和目的基因自身环化.
(2)酶切获取HBsAg基因后,需用DNA连接酶将其连接到pPIC9K质粒上,形成重组质粒,并将其导入大肠杆菌以获取大量重组质粒.
(3)步骤3中应选用限制酶BglⅡ来切割重组质粒获得重组DNA,然后将其导入巴斯德毕赤酵母菌细胞.
(4)为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功,在培养基中应该加入卡拉霉素以便筛选,转化后的细胞中是否含有HBsAg基因,可以用DNA分子杂交方法进行检测.
(5)转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后,需要向其中加入甲醇以维持其生活,同时诱导HBsAg基因表达.
(6)与大肠杆菌等细菌相比,用巴斯德毕赤酵母菌细胞作为基因工程的受体细胞,其优点是在蛋白质合成后,细胞可以对其进行加工(修饰)并分泌到细胞外,便于提取.
17.某生物兴趣小组在学习了DNA的粗提取和鉴定实验后,尝试开展RNA的粗提取和鉴定实验.通过查阅资料,制订了以下的实验方案:
【实验课题】酵母RNA的提取和鉴定
【实验目的】1.从酵母中提取RNA;2.鉴定RNA.
【实验原理】微生物是工业上大量生产RNA的原料,其中以酵母尤为理想,因为酵母核酸中主要是RNA,DNA很少,菌体易收集,RNA易分离.RNA不溶于乙醇和无水乙醚.RNA热稳定性较蛋白质强.利用稀碱法(稀碱能使细胞壁溶解)或高盐法(高浓度的盐改变细胞膜的通透性)来释放RNA.RNA水解液(加硫酸、加热)+苔黑酚-FeCl3试剂加热直到沸腾1分钟,会呈现墨绿色.
【实验材料】干酵母粉、离心机、烧杯、试管、玻璃棒等;0.2%氢氧化钠、95%乙醇、无水乙醚、乙酸、10%硫酸溶液、苔黑酚-FeCl3试剂等.
【实验步骤】
①称6克干酵母
②加0.2%氢氧化钠45mL,沸水加热20分钟,搅拌,后加乙酸7滴
③离心10分钟后取上清液
④边搅拌边缓慢加95%乙醇并静置10分钟
⑤离心后先用95%乙醇洗两次,再用无水乙醚洗两次
⑥获得RNA粗制品
⑦RNA鉴定
请根据实验方案,思考并回答下列问题:
(1)酵母菌细胞中的RNA主要分布在细胞质中.酵母菌也是便于用来研究细胞呼吸不同方式的好材料,理由是酵母菌在有氧和无氧条件下都能生存,属于兼性厌氧型.
(2)实验步骤⑤中,离心后取沉淀物(填“上清液”或“沉淀物”)用乙醇、无水乙醚进行洗涤.
(3)RNA提取过程要注意温度的控制,在20~70℃的温度范围内停留的时间不能太长,其原因是分解核酸的酶在此温度范围内活性高,会使RNA降解;
(4)稀碱法提取RNA须在沸水浴中进行的目的,一是使杂质蛋白质变性,二是使核酸水解酶失活,减少RNA的分解,以便获得更多更纯净的RNA.
(5)若用花椰菜来提取DNA,可用洗涤剂瓦解细胞膜,然后充分研磨,实验中研磨速度要缓慢.
 0  137861  137869  137875  137879  137885  137887  137891  137897  137899  137905  137911  137915  137917  137921  137927  137929  137935  137939  137941  137945  137947  137951  137953  137955  137956  137957  137959  137960  137961  137963  137965  137969  137971  137975  137977  137981  137987  137989  137995  137999  138001  138005  138011  138017  138019  138025  138029  138031  138037  138041  138047  138055  170175 

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