10.EPSPS是叶绿体中的一种酶,它能催化芳香族氨基酸的合成;草甘膦是一种除草剂,它能竞争性抑制EPSPS的作用而使植物死亡.因此草甘膦的使用也会影响到农作物的正常生长.目前,已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因,若将该基因转入农作物植物细胞内,从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦.
(1)普通大豆施用草甘膦之后,电镜下可以看到叶绿体很快变形,其原因是氨基酸合成受阻直接影响了蛋白质的合成,使叶绿体内的其结构和功能严重受损从而使植物死亡.
(2)研究人员以大豆“黑农37”胚尖为外植体,利用农杆菌介导法将EPSPS基因成功转入大豆,大豆产生了更多的EPSPS来抵抗草甘膦,成为抗除草剂(草甘膦)大豆.
①下表分别表示4种限制性核酸内切酶的酶切位点.假设位于EPSPS基因两侧的DNA序列
分别为$\left.\begin{array}{l}{-CAGGATCCC}&{-}\\{-GTCCTAGGG}&{-}\end{array}\right.$和$\left.\begin{array}{l}{-AAGCTTGAC}&{-}\\{-TTCGAACTG}&{-}\end{array}\right.$,则应选择表中酶2和3进行酶切.若EPSPS基因的右侧序列如后者所示,请在如图1方框内画出经酶切后产生的两个末端的碱基序列.
酶的种类1234
酶切位点
②若多个如图2所示的片段甲和片段乙混合在一起,用DNA连接酶拼接得到环状DNA,其中只由两个DNA片段连接成的环状DNA分子有3种.
(3)要测定EPSPS基因最终是否整合到大豆的某一染色体上,可用DNA分子杂交方法,或直接测定该染色体的DNA序列
(4)图3是目的基因EPSPS(4.0kb,1kb=1000对碱基)与pUC18质粒(2.7kb)重组的示意图.图中Ap′是抗氨苄青霉素基因,lacZ是显色基因,其上的EcoRⅠ识别位点位于目的基因插入位点的右侧.现用EcoRⅠ酶切质粒,酶切后进行电泳观察,若出现长度为3和3.7kb和1.0和5.7kb的片段,则可以判断该质粒已与目的基因重组成功.(重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRI的识别位点之间的碱基对忽略不计).
 0  134468  134476  134482  134486  134492  134494  134498  134504  134506  134512  134518  134522  134524  134528  134534  134536  134542  134546  134548  134552  134554  134558  134560  134562  134563  134564  134566  134567  134568  134570  134572  134576  134578  134582  134584  134588  134594  134596  134602  134606  134608  134612  134618  134624  134626  134632  134636  134638  134644  134648  134654  134662  170175 

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