4.为获取可降解高盐度工业废水中有机物的耐盐菌,研究人员进行了如下实验:
①制备含3%NaCl的固体培养基,以及含3%、5%和7%NaCl以高盐度工业废水中有机物为碳源的液体培养基;
②将高盐度废水采用平板划线法接种于含3%Nacl的固体培养基,如图一.然后置于适宜条件下培养一段时间,观察形成的菌落特征;
③将分离纯化后的菌株接种到试管固体斜面培养基上,适宜条件下培养适当时间,将该试管短期保藏待用;
④取固体斜面上的菌株制成菌液,取等量菌液,分别加入到步骤①中制备的3组液体培养基中摇床培养35小时,定时取样统计活菌数目.测定结果如图二所示.

回答下列问题:
(1)配制培养基时,灭菌、添加NaCl溶液和调节pH的先后顺序是添加NaCI溶液、调节pH、灭菌.
(2)步骤②平板划线操作过程中,第一次划线前灼烧接种环的目的是防止杂菌污染,第二次及之后的几次划线前灼烧接种环的目的是杀死上次划线后接种环上残留的菌种(使下一次划线时,接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端).完成图一所示操作,至少需要灼烧接种环6次.
(3)步骤④中统计活菌数目用稀释涂布平板法,该方法统计的活菌数小于(填“大于”、“等于”或“小于”)实际数值.直接从静置的培养液中取样计数的做法是错误的,正确的操作是将培养液摇匀后取样计数.若每种浓度设3个重复实验,每次统计活菌数目时需要从9个培养瓶中取样.
(4)由图二可知,该耐盐菌最适合处理含3% (浓度)NaCl的废水.
3.常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖,但自然界中的某些酵母可以分解木糖产生酒精,但对酒精的耐受能力较差,科学家们利用人工诱变的技术获得了能利用木糖且对酒精耐受力强的酿酒酵母突变型,请回答下列问题:
(1)获得上述突变型酿酒酵母的方法是:人工诱变后,使用木糖为碳源且添加一定浓度酒精的的液体培养基进行选择培养.
(2)获得上述突变型酿酒酵母后,需要进行分离纯化,操作步骤如图:

制备以上过程所需的培养基时需要倒平板操作,平板冷凝后需要倒置的原因是防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染,图乙是图甲过程A纯化培养的结果,接种时划线的顺序是①③②,图丙是图甲过程C纯化培养的结果,推测接种时主要的操作失误是涂布不均匀.
(3)为测定突变型酿酒酵母的活性,用适宜浓度的海藻酸钠溶液将活化的酵母细胞固定化后发酵无菌麦芽汁制酒,实验中当海藻酸钠浓度较低时,细胞活力较低原因是海藻酸钠浓度较低时包埋不紧密,酶分子容易漏出,数量不足.若发酵条件符合操作要求.10天后检查发酵液发现麦芽汁几乎无酒味,发酵失败最可能的原因是将海藻酸钠熔化时未冷却就将活化的酵母菌液倒入.
(4)在血红蛋白的提取和分离实验中,从红细胞中释放出血红蛋白常用的方法是将红细胞放在蒸馏水和甲苯溶液中吸水胀破,纯化蛋白质常用的方法是凝胶色谱法(或电泳、透析法、离心沉降法).
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