1.研究者取野生型小鼠(Ⅰ++)的胚胎干细胞,转入含neor基因(新霉素抗性基因)的DNA片段,定向突变Ⅰ+基因(结果如图1),再将突变的胚胎干细胞移回野生型小鼠胚胎,培育出带突变基因(Ⅰ-)的杂合子小鼠.

(1)将外源DNA片段导入胚胎干细胞后,需用含新霉素的培养基培养细胞,以筛选得到突变的胚胎干细胞
(2)用此杂合体小鼠与野生型小鼠进行杂交实验,并通过DNA分子杂交技术检测小鼠的基因型,结果如图2.
①检测小鼠的基因型,需根据外显子2和neor基因序列设计DNA分子探针.根据杂交实验结果推测,I基因的功能是与生长发育(性状)有关.
②分析系谱图不能(能/不能)判断Ⅰ+、Ⅰ-基因的显、隐性.
③只有突变基因来自父本(父本/母本)时,杂合子小鼠才表现出发育迟缓,由此推测来自母本的I基因在体细胞中不表达.
④提取小鼠体细胞的总RNA,加入Actin基因(编码细胞骨架蛋白)和neor基因的RNA探针,之后加入RNA酶水解单链RNA.若探针能与细胞样品的RNA结合成双链RNA则不被酶水解而保留,电泳分析时呈现明显条带(在记录实验结果时,有明显条带用“+”表示,无明显条带用“一”表示).请将支持③推测的实验结果填入表中ⅰ、ⅱ、ⅲ处.
野生型小鼠突变基因来自父本的杂合子小鼠突变基因来自母本的杂合子小鼠
Actin基因的RNA探针+++
neor基因的RNA探针ⅰ-ⅱ+ⅲ-
(3)杂合子小鼠雌雄个体交配,则后代的表现型及比例为野生型:发育迟缓型=1:1.
14.青光眼是导致人类失明的三大致盲眼病之一,其中发育性青光眼(婴幼儿型和青少年型)具有明显的家族遗传倾向,如图是某家系发育型青光眼的系谱图.

(1)发育型青光眼是单基因显性遗传病,根据如图系谱推断,致病基因应位于常染色体上,其遗传时遵循基因的分离定律.
检查发现,发育型青光眼患者角膜小梁细胞中M蛋白异常.为研究其病因,研究者用含荧光蛋白基因的质粒与M蛋白基因构建基因表达载体,分别导入Hela细胞中进行培养,一段时间后检测培养液和细胞中荧光的分布情况,实验分组及检测结果如表:
(G:绿色荧光蛋白基因;R:红色荧光蛋白基因;M+:正常人M蛋白基因;M-:青光眼患者M蛋白基因;两基因表达的产物是一个整体)
1组2组3组4组5组6组
导入Hela细胞的质粒(局部)

荧光检测细胞内有红色荧光有绿色荧光有红色荧光有绿色荧光有红色荧光有红色荧光和绿色荧光
培养液无荧光无荧光有红色荧光有绿色荧光无荧光无荧光
(2)构建基因表达载体时必需的工具酶是b和d.
a.解旋酶  b.DNA连接酶  c.Taq酶  d.限制酶  e.逆转录酶
(3)根据如表推测,发育型青光眼的病因是M蛋白不能(“能”或“不能”)正常分泌到细胞外,最终导致小梁细胞功能异常.
(4)如表中第4组、5组、6组组实验可以为“发育型青光眼是显性遗传病”这一结论提供重要证据.
(5)为进一步研究M蛋白出现异常的原因,研究者提取了M-基因进行测序,然后与M+基因进行比对,其结果如下:

分析可知,患发育型青光眼的根本原因是基因中的碱基对由C∥G变成了T∥A.
 0  128268  128276  128282  128286  128292  128294  128298  128304  128306  128312  128318  128322  128324  128328  128334  128336  128342  128346  128348  128352  128354  128358  128360  128362  128363  128364  128366  128367  128368  128370  128372  128376  128378  128382  128384  128388  128394  128396  128402  128406  128408  128412  128418  128424  128426  128432  128436  128438  128444  128448  128454  128462  170175 

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