9.人抗凝血酶Ⅲ由人体肝细胞产生,具有抗凝血、防血栓的作用.研究人员通过培育山羊乳腺生物反应器大量生产人抗凝血酶Ⅲ.请回答下列问题:
(1)获取人抗凝血酶Ⅲ基因常用方法有两种,一种是从人的肝细胞(肝脏)中获取该基因mRNA,逆转录成cDNA.另一种是PCR,根据人抗凝血酶Ⅲ基因上游及下游的碱基序列,设计2种特异性引物,从染色体DNA上获取并扩增人抗凝血酶Ⅲ基因.在PCR过程中,两个引物是Taq酶(耐高温DNA聚合酶)的结合位点,也是子链延伸的起点,dNTP(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)在此过程中的作用是提供合成DNA的原料和能量.
(2)重组人抗凝血酶Ⅲ基因表达载体由山羊β-酪蛋白基因启动子、人抗凝血酶Ⅲ基因、标记基因和终止子组成,其中山羊β-酪蛋白基因启动子决定了人抗凝血酶Ⅲ基因只能在山羊乳腺细胞中特异性表达.
(3)山羊的ES细胞来自早期胚胎干细胞.在饲养层细胞上培养时,ES细胞具有只分裂不分化的特性.将重组人抗凝血酶Ⅲ基因表达载体包埋在由磷脂双分子层构成的脂质体内并转染ES细胞时,该表达载体进入ES细胞的方式为胞吞.
(4)对山羊进行同期发情和超数排卵处理,得到代孕母羊和多个卵母细胞,当卵母细胞培养至MⅡ中期(减数分裂第二次分裂中期)时,可去核并移入上述ES细胞的细胞核,完成核移植.为选择雌性胚胎,可在囊胚时取滋养层细胞做DNA(基因)分析用以鉴定性别.对于羊奶中是否含有人抗凝血酶Ⅲ,可用抗原-抗体杂交方法检测.
 0  128265  128273  128279  128283  128289  128291  128295  128301  128303  128309  128315  128319  128321  128325  128331  128333  128339  128343  128345  128349  128351  128355  128357  128359  128360  128361  128363  128364  128365  128367  128369  128373  128375  128379  128381  128385  128391  128393  128399  128403  128405  128409  128415  128421  128423  128429  128433  128435  128441  128445  128451  128459  170175 

违法和不良信息举报电话:027-86699610 举报邮箱:58377363@163.com

精英家教网