15.2013年7月,中国试管婴儿之母--卢光琇教授与研究伙伴共同宣布全球首批经全基因组测序的PGD/PGS试管婴儿在长沙诞生.新技术的突破意味着通过设计试管婴儿解决部分不孕不育问题的同时,部分肿瘤疾病、遗传性疾病的家族性遗传也将有望避免.
(1)设计试管婴儿时为了提高受孕率,胚时多采用多胚胎移植,故需要用促性腺激素处理,促进母亲排出更多的卵子.
(2)胚胎发育的卵裂期在透明带(填“透明带”或“放射冠”)内进行.受精卵经体外培养发育成桑椹胚或囊胚时可用于胚胎移植,而胚胎移植属于胚胎工程的常用技术之一.胚胎工程是指对动物的早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术.还包括体外受精、胚胎分割移植、胚胎干细胞培养等技术.
(3)为了某些需要,需对胚胎的性别进行鉴定.目前最有效最准确的方法是SRY-PCR 法,操作的基本程序是:从被测的囊胚中取出几个滋养层(填“部位”)细胞,提取DNA; 然后用位于Y染色体上的性别决定基因(即SRY基因)的一段碱基作引物,以滋养层细胞的DNA为模板进行PCR扩增;与SRY特异性探针出现阳性反应者,胚胎为男性.
(4)设计试管婴儿、克隆人等都是引起人们广泛争论的问题.我国不反对治疗性克隆,即可利用人体细胞核移植等技术治疗人类疾病,在去除卵母细胞的细胞核时,可用微型吸管把位于卵细胞膜和透明带之间的第一极体一并吸出.
13.某一质粒载体如图1所示,若将 HSA 基因插入到 Ampr 或 Tetr 中会导致相应的基因失活(Ampr 表示氨苄青霉素抗性基因,Tetr 表示四环素抗性基因).有人将此质粒载体用 BamHI 酶切后,与用 BamHI 酶切获得的目的基因混合,加入 DNA 连接酶进行连接反应,用得到的混合物直接转化大肠杆菌,结果大肠杆菌有的未被转化,有的被转化.被转化的大肠杆菌有三种,分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌.回答下列问题:

(1)质粒载体作为基因工程的工具,应具备的基本条件有能够自我复制、具有标记基因、具有一个至多个限制酶切割位点(答出两点即可).而作为基因表达载体,除满足上述基本条件外,还需具有启动子和终止子.若 采用 PCR 技术扩增 HSA 基因,图2中箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向,请用箭头在方框内标出标出另 一条引物的位置及扩增方向.
(2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选,在上述四种大肠杆菌细胞中,未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的,其原因是二者均不含氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上都不能生长;并且含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒的细胞也是不能区分的,其原因是二者都含氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上均能生长.在上述筛选的基础上,若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落,还需使用含有四环素的固体培养基.
(3)将重组质粒导入大肠杆菌时需用Ca2+处理大肠杆菌使之成为感受态.
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