12.探究如何从土壤中分离自生固态氮菌与计数.实验原理:农田的表层土壤中,自生固氮菌的含量比较多.将用表土制成的稀泥浆,接种到无氮培养基上进行培养.在这种情况下,只有自生固氮菌才能生长繁殖.用这种方法,可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来.
材料用具:农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛9mL无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛90mL无菌水的锥形瓶、恒温箱.
方法步骤:
(1)倒平板:分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板,应在酒精灯火焰旁操作.
(2)制备土壤稀释液:取土样10g加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中,充分摇匀.用无菌吸管吸取上清液lmL,转至9mL的无菌水的大试管中,依次稀释到107倍稀释度.
(3)涂布:按照由101~108倍稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布,每个稀释度下,无氮培养基应至少涂布3个子板,牛肉膏蛋白胨培养基涂布1个.
(4)培养:放入恒温箱内,在28~30℃下培养3~4d.
(5)细菌的计数:培育过程中,每隔24小时统计一次菌落数目,当菌落数目稳定时,选取茵落数在30~300的平板进行计数.
(6)预期结果:相同稀释度下,牛肉膏蛋白胨平板上的菌落数多于(填“多于”或“少于”)无氮培养基上的数目,原因是无氮培养基上可以生存和繁殖的只是土壤中的自生固氮菌,而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类的生存.
11.为了调查某河流的水质状况,某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量,并进行了细菌分离等工作.回答下列问题:
(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量.在涂布接种前,随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间,这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格;然后,将1mL水样稀释100倍,在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液;经适当培养后,3个平板上的菌落数分别为39、38和37,据此可得出每升水样中的活菌数为3.8×107.用这种方法测定密度,实际活菌数量比测得的数量多,因为同一个菌落可能是两个或多个细菌连在一起形成的.
(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌,操作时,接种环通过灼烧灭菌,在第二次及以后的划线时,总是从上一次划线的末端开始划线,这样做的目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落.
(3)示意图A和B中,B表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果.图A是采用平板划线法接种方法获得的平板.
(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀,一部分进行静置培养,另一部分进行振荡培养,结果发现:振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快.分析其原因是:振荡培养能提高培养液中溶解氧(氧气)的含量,同时可使菌体与培养液充分接触,提高营养物质的利用率.
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