16.骨肉瘤是最常见的恶性成骨性肿瘤之一.科研人员研究曲古抑菌A(TSA)对人骨肉瘤细胞凋亡的影响及作用机制,为临床治疗寻找新方向.实验过程如下:
步骤1用含青霉素和链霉素的高糖培养基,在37℃、5%CO2培养箱中培养人骨肉瘤细胞一段时间.
步骤2取适宜浓度的处于生长旺盛期的人类骨肉瘤细胞,用加入不同浓度的TSA(0~200ng•mL-1)的培养基继续培养24h.
步骤3对各组细胞进行抽样检测,检测方法是先用台盼蓝试剂(一种细胞活性染料)染色再用血细胞计数板计数,统计细胞存活率(未染色细胞数/细胞总数×100%),结果如图1.
步骤4分别提取TSA浓度为0ng•mL-1、25ng•mL-1、50ng•mL-1处理的3组细胞,测量细胞中与凋亡相关的基因(Bax、Bcl-2)和β-肌动蛋白基因(不同的组织细胞中表达相对恒定)表达的蛋白质量并计算比值,结果如图2.

分析回答:
(1)骨肉瘤细胞的恶性增殖和转移与细胞膜上糖蛋白(成分)种类和数量的改变有关.高糖培养基中加入青霉素和链霉素的目的是防止杂菌污染,细胞培养箱中保持5% CO2的作用是维持培养液pH.
(2)步骤2中,设置0ng•mL-1 TSA实验的主要目的是排除非测试因素对实验结果的影响.
(3)用台盼蓝试剂检测细胞活性的主要原理是活细胞的细胞膜具有选择透过性,台盼蓝不能进入活细胞内(死细胞膜失去选择透过性,台盼蓝能进入死细胞内).
(4)图1所示结果表明TSA浓度越高对骨肉瘤细胞凋亡的促进作用越强.
(5)根据图2判断,骨肉瘤细胞中Bax基因过度表达会加速细胞凋亡.
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