15.H18杂交瘤细胞在培养过程中的凋亡现象制约着生产能力的提高.通过基因工程可改造H18杂交瘤细胞的抗凋亡能力,相关步骤如下:
①细胞培养:将人肝癌细胞在含10%小牛血清的培养液中培养.一段时间后,用胰蛋白酶处理培养液,漂洗后调整细胞悬液浓度为1×107个•mL-1
②免疫小鼠:向小鼠体内注射肝癌细胞悬液0.8mL,以后每隔2周免疫1次,共3次,最后一次免疫后3天,取脾脏制成细胞悬液备用.
③细胞融合及筛选:将脾脏细胞悬液和骨髓瘤细胞悬液在50%PEG作用下进行融合,筛选出能产生抗人肝癌单克隆抗体HAb18的H18杂交瘤细胞.
④改造H18杂交瘤细胞:利用PCR技术获得小鼠的bcl-XL基因(抗凋亡基因),构建表达载体,通过脂质体法导入H18杂交瘤细胞,再筛选出抗凋亡能力明显提高的H18杂交瘤细胞.
请分析回答:
(1)步骤①肝癌细胞合成培养液中特有的成分是血清(血清、血浆),培养液中还需加入一定量抗生素的目的是防止杂菌污染.
(2)步骤②中,肝癌细胞免疫小鼠需在一定时间内间隔注射3次,其目的是刺激小鼠产生更多的淋巴细胞.
(3)步骤③中,除了用50%PEG促进细胞融合外,常用的生物诱导因素是灭活的病毒,物理诱导方法有电刺激(震荡或离心)(写出一种即可).步骤④中通过脂质体法能将表达载体导入H18杂交瘤细胞依赖的原理是膜的流动性.
(4)与普通抗肝癌药物相比,用抗人肝癌单克隆抗体HAb18与相应抗癌药物结合制成的“生物导弹”治疗肝癌的主要优点是能将药物定向带到癌细胞所在部位,减少对正常细胞的伤害,减少用药剂量.
(5)乙醇有诱导细胞凋亡的作用.为了建立H18杂交瘤细胞凋亡检测模型,科研人员利用不同浓度的乙醇溶液诱导H18杂交瘤细胞凋亡,其结果如图所示.抗凋亡细胞株的建立与筛选应选择的诱导条件是C(用图中字母表示).
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