4.GDNF是一种神经营养因子,对损伤的神经细胞具有营养和保护作用.研究人员构建了含GDNF基因的表达载体(如图1所示),并导入到大鼠神经干细胞中,用于干细胞基因治疗的研究.请回答:

(1)构建含GDNF基因的表达载体时,需选择图1中的XhoⅠ限制酶进行酶切.
(2)经酶切后的载体和GDNF基因进行连接,连接产物经筛选得到的载体主要有3种:单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接(如图1所示).为鉴定这3种连接方式,选择HpaⅠ酶和BamHⅠ酶对筛选得到的载体进行双酶切,并对酶切后的DNA片段进行电泳分析,结果如图2所示.图中第②泳道显示所鉴定的载体是正向连接的.
(3)将正向连接的表达载体导入神经干细胞后,为了检测GDNF基因是否成功表达,可用相应的抗体与提取的蛋白质杂交.当细胞培养的神经干细胞达到一定密度时产生接触抑制,换瓶后进行传代培养以得到更多数量的细胞,用于神经干细胞移植治疗实验.
(4)对于神经干细胞可以来源于胚胎干细胞的诱导分化,胚胎干细胞来源于原始性腺和早期胚胎,在培养时可以只分裂不分化,但是通过诱导可以分化成各种不同的组织细胞,胚胎干细胞的这个特性称为发育的全能性.
(5)胚胎干细胞也可以来自于核移植的重组细胞,一般体细胞核移植要比胚胎细胞核移植难度大,原因是细胞分化程度大,细胞核不易实现全能性,而取自卵巢的卵母细胞需要培养到MⅡ中期,才可进行核移植.
3.2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白(GFP)方面做出突出贡献的科学家.绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光,这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况,帮助推断蛋白质的功能.如图1为我国首例绿色荧光蛋白(GFP)转基因克隆猪的培育过程示意图,据图回答:

(1)图中通过过程①、②形成重组质粒,需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒.限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是-G↓GATCC-,限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-.在质粒上有酶Ⅰ的一个切点,在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点.
①如图2所,请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端.
②在DNA连接酶的作用下,上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接?理由是:可以连接,因为由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的.
(2)过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时,采用最多也最有效的方法是显微注射技术.
(3)如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上,GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因,其作用是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因.获得的转基因克隆猪,可以解决的医学难题是,可以避免发生免疫排斥反应.
(4)目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白,黄色荧光蛋白等,采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是:②①③④(填序号).
①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列
③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)
④表达出蓝色荧光蛋白.
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