3.下面是一项“利用转基因番茄生产人胰岛素的方法”的专利摘要,请回答:
本发明利用转基因番茄作为生物反应器生产人胰岛素.所用的人胰岛素基因是依据植物偏爱密码子的原则来设计所含的密码子,通过人工合成若干DNA片段,拼接而成,并且在C端加上KDEL的内质网滞留序列,避免胰岛素在植物细胞中的降解.将该基因置于CaMV 35S启动子和果实专一性启动子2A12的驱动之下通过农杆菌介导的方法转入番茄中,在番茄的果实中表达人胰岛素.
(1)此基因工程中的目的基因是人胰岛素基因,将人工合成的DNA片段拼接在一起,所需要的酶是DNA连接酶,T4-DNA连接酶还可以连接平末端.
(2)要想在体外获得大量该目的基因的片段,可以采用PCR扩增技术(用字母).
(3)试分析在C端加上KDEL的内质网滞留序列,为什么可以避免胰岛素在植物细胞中的降解?使胰岛素合成后在植物内质网中保存,以免在细胞内被降解.
(4)用目的基因与农杆菌的Ti质粒结合构建表达载体,该表达载体的组成中不应含有的是④⑦(从下列选项中选择).
①目的基因   ②CaMV 35S启动子  ③果实专一性启动子2A12   ④RNA引物
⑤标记基因   ⑥T-DNA            ⑦RNA聚合酶基因片段      ⑧终止子
(5)若培育转基因动物,用显微注射法,将目的基因导入受精卵中.要确定目的基因是否整合到染色体上,一般需用放射性同位素标记(或荧光分子标记)的目的基因(单链)做探针,与转基因小鼠细胞中提取的核DNA进行分子杂交.
19.人的血清白蛋白(HSA)在临床上需求量很大,通常从人血中提取.但由于艾滋病病毒(HIV)等人类感染性病原体造成的威胁与日俱增,使人们对血 液制品顾虑重重.如果应用基因工程和克隆技术,将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中,那么利用牛的乳汁生产血清白蛋白就成为可能.其大致过程如下:
Ⅰ.采集良种供体奶牛的卵母细胞和精液,通过体外受精,形成奶牛受精卵;
Ⅱ.将人血清白蛋白基因导入奶牛受精卵,形成重组细胞;
Ⅲ.电脉冲刺激重组细胞促使其形成早期胚胎;
Ⅳ.将胚胎移植到受体母牛的子宫中,最终发育成转基因小牛.
请回答下列问题:
(1)步骤Ⅰ中,在体外受精前,需要对奶牛的精子进行获能处理.受精时,往往一个卵母细胞只能和一个精子结合,受精过程中防止多精入卵的生理反应包括透明带反应和卵黄膜封闭作用
(2)实验步骤Ⅲ中,进行动物早期胚胎的体外培养时,培养液中除了含有各种无机盐和有机盐类、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外,还要添加激素和动物血清.
(3)实验步骤Ⅳ中,在胚胎移植前可以取囊胚的滋养层细胞 做DNA分析鉴定性别,应选择性别为雌性的奶牛胚胎进行移植.
(4)若需迅速得到大量转基因奶牛,现有两种处理方法:
方法A:在步骤Ⅳ中将早期胚胎分离成若干个胚胎细胞,让其分别发育成一头小牛.进行上述操作时,应选择发育良好形态正常的桑椹胚或囊胚进行操作.
方法B:在步骤Ⅳ中将早期胚胎细胞的细胞核移植到普通黄牛的去核卵细胞细胞中,使其重组并发育成新胚胎.为获得大量可供移植的胚胎细胞核,可将早期胚胎细胞分离出来,在添加抑制因子培养液中,将其培养成能够增殖而不发生分化的胚胎干细胞,再从该细胞中提取所需的细胞核.上述两种方法中,最能保持步骤Ⅳ中早期胚胎细胞遗传特征的是方法A.
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