1.回答下列有关生物工程的问题.
材料1抗体的制备经历了细胞学层面和分子学层面两种合成途径的研究.下列是生物学技术制备抗体的两个途径模式简图.

普通质粒V1基因大肠杆菌免疫后的人体分离细胞AmRNA③结构甲抗体⑤细胞增殖抗体⑥Y细胞①②④
(72)在获取抗体之前,需要向健康人体注射特定抗原(如乙肝疫苗),并且每隔一周重复注射一次.免疫学称细胞A为浆细胞(效应B淋巴细胞),该细胞在人体主要介导体液免疫.
(73过程①至②获取的抗体称为单克隆抗体,其中①是细胞融合过程,Y细胞称为杂交瘤细胞.
材料2 上图中,结构甲的建构可用下图1和2表示.图1表示含有目的基因的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列.现有4种限制性核酸内切酶,它们识别的碱基序列和酶切位点分别为如表所示.
限制酶MspⅠBamHⅠMboⅠSmaⅠ
识别序列及切割位点




(1)若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段,其产物长度为537bp,790bp,661bp.
(2)若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换,那么基因D就突变为基因d.从杂合子中分离出图1及对应的DNA片段,用限制酶SmaⅠ完全切割,产物中共有4种不同长度的DNA片段.
(3)上述结构中的建构过程可知,在限制酶作用下得到的产物有多种,生产上多采用酶的固定化技术来降低目的基因分离提取的难度,也有利于限制酶的回收和再利用.
(4)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行拼接,形成重组质粒,那么应选用的限制酶是BamHⅠ.在导入重组质粒后,为了筛选出含有重组质粒的大肠杆菌,一般需要添加抗生素B的固体(固体/液体)培养基进行培养.在培养前,培养基必须先经过灭菌,所用的方法是高压蒸汽灭菌;采用平板划线法的方法接种以获得单菌落后继续筛选.
14.请分析回答下列有关基因工程问题
胰岛素A、B链分别表达法是生产胰岛素的方法之一. 图1是该方法所用的基因表达载体,图2表示利用大肠杆菌作为工  程菌生产人胰岛素的基本流程(融合蛋白  A、B分别表示β-半乳糖苷酶与胰岛素A、B链融合的蛋白).

(1)图1基因表达载体中没有标注出来的基本结构是终止子.
(2)图1中启动子是RNA聚合 酶识别和结合的部位,有了它才能启动目的基因的表达;氨苄青霉素抗性基因的作用是作为标记基因,将含有重组质粒的大肠杆菌筛选出来.
(3)构建基因表达载体时必需的工具酶有限制酶和DNA连接酶.
(4)β-半乳糖苷酶与胰岛素A链或B链融合表达,可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部,其意义在于防止胰岛素的A、B链被菌体内蛋白酶降解.
(5)溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键,用溴化氰处理相应的融合蛋白能获得完整的A链或B链,且β-半乳糖苷酶被切成多个肽段,这是因为β-半乳糖苷酶中含多个甲硫氨酸,而胰岛素A、B链中不含甲硫氨酸.
(6)根据图2中胰岛素的结构,请推测每个胰岛素分子中所含游离氨基的数量.你的推测结果是至少2个,理由是两条肽链的一端各有一个游离的氨基,氨基酸的R基中可能还含有游离的氨基.
(7)如果图1所示的载体可被A、B、C三种限制性内切酶同时切割.单独A切割得一条长链,单独B切也得一条长链,A和C同时切割得2个500bp和1个2666bp片段,B和C同时切割得2个250bp和1个3166bp片段.若以A的切割位点为计算起点,则B的切割位点与A点最短长度为750bp,C的两个切割位点与A点的最短距离分别为500bp、1000bp.
(8)如限制酶SmaI能识别如图3的「5‘-CCCGGG-3’」6个碱基序列,并在中央(图中箭头位置)切断DNA.则用限制酶SmaI处理如图的线状双链DNA时,请以箭头标出切割位置.
 0  118060  118068  118074  118078  118084  118086  118090  118096  118098  118104  118110  118114  118116  118120  118126  118128  118134  118138  118140  118144  118146  118150  118152  118154  118155  118156  118158  118159  118160  118162  118164  118168  118170  118174  118176  118180  118186  118188  118194  118198  118200  118204  118210  118216  118218  118224  118228  118230  118236  118240  118246  118254  170175 

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