7.基因工程育种中,常用两种限制酶同时切割目的基因和载体,以保证重组DNA序列的唯一性,利用带有两种标记基因的质粒构建的重组质粒,便于筛选导入重组质粒的受体细胞.如下图所示为转基因抗虫棉的培育过程示意图,请据图回答下列问题:

注:HindⅢ、BamHⅠ、SalⅠ为三种限制性内切酶.影印培养法:是一种类似“盖章”的接种方法,使一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落.
(1)如果将抗虫基因直接导入棉花细胞,一般情况下,棉花不会具有抗虫特性,原因是抗虫基因在棉花细胞中不能稳定存在并复制和表达,因此需要构建基因表达载体.
(2)在构建重组质粒时,应选用SalI和HindIII两种限制酶对目的基因和质粒进行切割,以保证重组DNA的准确连接.
(3)图中运用影印培养法检测基因表达载体中是否导入了农杆菌,以便于筛选导入目的基因的受体细胞.培养基除了含有细菌生长繁殖必需的营养成分外,培养基A和B还应分别添加氨苄青霉素、四环素.筛选的结果表明,含有目的基因的是4和6菌落中的细菌.为了确定抗虫棉是否培育成功,既要用放射性同位素标记抗虫基因的DNA片段作探针进行分子杂交检测,又要用抗虫的接种实验从个体水平鉴定棉花植株的抗虫特性.
(4)将转入抗虫基因的棉花细胞培育成完整的植株需要用植物组织培养技术,愈伤再分化进而形成完整植株,此过程除营养物质外还必须向培养基中添加植物激素(生长素和细胞分裂素).
(5)科学家通常将目的基因导入到植物细胞的线粒体(或叶绿体)中,是为了防止转基因作物的目的基因通过花粉传递给近缘物种.
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