3.卡那霉素和头孢霉素都有抗菌作用,此外,卡那霉素还对葡萄细胞有抑制作用.研究人员将Barnase基因(雄性不育基因)转入葡萄细胞,利用卡那霉素和头孢霉素,通过植物克隆方法成功培育出大粒、无核的葡萄新品种.请回答:
(1)构建含Barnase基因、β-葡糖苷酸酶基因和卡那霉素抗性基因的重组质粒,导入农杆菌,在固体培养基中培养形成单菌落以便鉴定是否混有杂菌,再用接种环将农杆菌转移至LB液体培养基中进行扩大培养.构建重组质粒需要用到的工具酶是限制性核酸内切酶、DNA连接酶.
(2)将经过消毒的幼嫩葡萄叶片切成小块,浸入农杆菌悬浮液中,4分钟后取出(此时已有较多农杆菌附着在叶片小块上)并接种到固体培养基中.培养至第3天时,可以看到在叶片小块周围出现愈伤和大量菌落.这时再用头孢霉素处理叶片小块,其目的是C(A.抑制葡萄细胞脱分化   B.促进葡萄细胞再分化   C.杀灭农杆菌   D.促进农杆菌生长).
(3)将叶片小块放入卡那霉素培养基中培养一段时间后,转移至生芽培养基中,待其长出丛状苗后,再转移至生根培养基中继续培养形成试管苗.卡那霉素培养基起着筛选作用,植物克隆的技术基础是植物组织培养.
(4)在卡那霉素培养基中,由于转化细胞对周围的非转化细胞有保护作用,获得的试管苗中可能存在假的转基因试管苗,因此还需对试管苗的β-葡糖苷酸酶基因的表达产物进行生化检测,才能鉴别出真正的转基因试管苗.
(5)最后,对转基因试管苗还需进行逐渐降低湿度的锻炼,使之适应自然环境.
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