下面是将乙肝病毒控制合成的病毒表面主蛋白的基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资料,请分析回答下列问题。

资料1:巴斯德毕赤酵母菌可用培养基中甲醇作为其生活的唯一碳源,同时AOX1基因(醇氧化酶基因)受到诱导而表达,5'AOX1和3'AOXl(TT)是基因AOX1的启动子和终止子,此启动子也能使外源基因高效表达。

资料2:巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒,下图为科学家改造的pPIC9K质粒,其与目的基因形成的重组质粒在特定部位酶切后形成的重组DNA片段可以整合到酵母菌染色体上,最终实现目的基因的表达。

(1)如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组,应该在HBsAg基因两侧的A和B位置接上_________限制酶识别序列(SnaB I、Avr II、SacI、Bgl II四种限制酶的识别序列均不相同),这样设计的优点是避免质粒和目的基因自身环化。

(2)酶切获取HBsA9基因后,需用______________将其连接到pPIC9K质粒上,形成重组质粒,根据步骤②可知步骤①将重组质粒先导入大肠杆菌的目的是______________。

(3)步骤3中应选用限制酶______________来切割从大肠杆菌分离的重组质粒从而获得图中所示的重组DNA片段,然后将其导入巴斯德毕赤酵母菌细胞。

(4)为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功,在培养基中应该加入______________以便筛选。

(5)转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后,需要向其中加入______________以维持其生活,同时诱导HBsA9基因表达。

(6)与大肠杆菌等细菌相比,用巴斯德毕赤酵母菌细胞作为基因工程的受体细胞,其优点是在蛋白质合成后,细胞可以对其进行_______并分泌到细胞外,便于提取。

(7)培育转化酵母细胞所利用的遗传学原理是______________。

 0  113692  113700  113706  113710  113716  113718  113722  113728  113730  113736  113742  113746  113748  113752  113758  113760  113766  113770  113772  113776  113778  113782  113784  113786  113787  113788  113790  113791  113792  113794  113796  113800  113802  113806  113808  113812  113818  113820  113826  113830  113832  113836  113842  113848  113850  113856  113860  113862  113868  113872  113878  113886  170175 

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