(15分)生物兴趣小组试图探究牛和山羊的瘤胃中的微生物对尿素是否有分解作用,设计了以下实验,并成功筛选到能降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如表所示,实验步骤如图所示。请分析回答问题:
KH2PO4 | 1.4g |
Na2HPO4 | 2.1g |
MgSO4·7H2O | 0.2g |
葡萄糖 | 10g |
尿素 | 1g |
琼脂 | 15g |
溶解后自来水定容到1000mL | |
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(1)培养基中加入尿素的目的是 ,原理是 。从同化作用类型来看的,该菌属于 。
(2)实验需要振荡培养,原因是 。转为固体培养时,常采用 的方法接种,获得单菌落后继续筛选。
(3)在实验过程中:①培养基、培养皿;②玻棒、试管、锥形瓶、吸管;③瘤胃中液体。其中需要灭菌是 (填序号)。
(4)分离分解尿素的细菌实验时,甲同学从培养基上筛选出大约150个菌落,而其他同学只选择出大约50个菌落。甲同学实验结果差异的原因可能有 (填序号)①取样不同 ②培养基污染 ③操作失误 ④没有设置对照
(5)以尿素为唯一氮源的培养基培养“目的菌”后,加入 指示剂后变红色,说明“目的菌”能分解尿素。理由是 。
(6)为进一步确定取自瘤胃中液体的适当稀释倍数,将接种的培养皿放置在37°C恒温培养箱中培养24h~48h,观察并统计具有红色环带的菌落数,结果如下表,其中 倍的稀释比较合适。
稀释倍数 | 103 | 104 | 105 | 106 | 107 |
菌落数 | >500 | 367 | 248 | 36 | 18 |
(15分)自然界中能够产生生物荧光的酶的统称为荧光素酶。荧光素酶及其合成基因在生物研究中有着广泛的利用。
(1)荧光素酶基因常被作为基因工程中的标记基因,其作用是将 筛选出来。
(2)下表为4种限制酶的识别序列和酶切位点,右下图为含有荧光素酶基因的DNA片段及其具有的限制酶切点。若需利用酶切法(只用一种酶)获得荧光素酶基因,最应选择的限制酶是 。
限制酶 | Msp I | BamH I | Mbo I | Sma I |
酶切位点 |
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(3)利用PCR技术扩增荧光素酶基因是利用 的原理,使荧光素酶基因数量呈 方式增加。
(4)迄今为止,可将上述具有荧光素酶基因的运载体导入动物细胞的技术,应用最多的、最有效的是 。经一系列步骤,将所获得的胚胎早期培养一段时间后,再移植到雌性动物的 或子宫内,使其发育成为具有新性状的动物。
(5)囊胚阶段的胚胎进行胚胎分割,可以提高胚胎的利用率,但在进行分割时应注意 。
(6)荧光素酶在ATP的参与下,可使荧光素发出荧光。生物学研究中常利用“荧光素-荧光素酶发光法”来测定样品中ATP的含量。某研究小组对“测定ATP时所需荧光素酶溶液的最佳浓度”进行了探究。
【实验材料】1×10-8mol/LATP标准液、缓冲溶液、70mg/L荧光素溶液(过量)、浓度分别为10、20、30、40、50、60、70mg/L的荧光素酶溶液。
【实验结果】见下图。
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【实验分析与结论】
①实验过程:为使结果更加科学准确,应增设一组 作为对照。除题目已涉及的之外,还需要严格控制的无关变量有 (至少写出一个)。
②实验结果:由图C可知, 点所对应的荧光素酶浓度为最佳浓度。
(7)食品卫生检验中,可利用上述方法测定样品中细菌的ATP总含量,进而测算出细菌的数量,判断食品污染程度。测算的前提是每个细菌细胞中ATP的含量 。