人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选．利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图所示（注：基因B为高血压相关基因）．

（1）进行①过程之前，需对人工采集的精子进行处理．完成②过程常采用的方法是，④过程中，为了防止污染，通常还要在细胞培养液中添加一定量的．
（2）从人体细胞中获取基因B时用到的工具酶是，在构建的基因表达载体中，高血压相关基因的首端必须有，它是RNA聚合酶的识别和结合部位．
（3）图示中甲为（时期）的去核卵母细胞，⑤过程操作技术叫做．
（4）要在分子水平上检测成功导入的B基因在大鼠中是否成功表达，可采用方法，如果高血压相关基因已在大鼠体内成功表达，可用其建立高血压转基因动物模型．

【选修3现代生物科技专题】
转基因草莓中有能表达乙肝病毒表面抗原的基因，由此可获得用来预防乙肝的一种新型疫苗，其培育过程如图所示（①至④代表过程，A至C代表结构或细胞）：

（1）这种新型疫苗，在免疫学中属于，图中可看出该疫苗的化学本质是．图中①过程用到的酶是DNA连接酶，所形成的B叫做．
（2）②过程常用处理农杆菌，使之成为细胞，利于完成转化过程．
（3）图中③过程叫做脱分化，④过程叫做，将叶盘培养成草莓幼苗的技术的原理是．
（4）②过程采用最多的是农杆菌，在分子水平上，可采用的方法来检测转基因草莓果实提取液中有无相应的抗原．
（5）乙肝病毒表面抗原基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为．

利用转基因奶牛乳腺生物反应器可生产人的生长激素，根据图回答有关问题．

（1）基因表达载体的组成，除了目的基因外，还必须有、以及标记基因等．
（2）在体外受精前，要对精子进行处理，对于牛的精子常采用．
（3）图中①过程常采用，图中②过程的培养液成分比较复杂，除一些无机盐和有机盐类外，还需要添加维生素、、氨基酸、核苷酸等成分，以及等物质．
（4）早期胚胎发育到才进行移植．

研究发现，将心肌细胞直接移植到心脏受损部位能够改善心脏功能，是一种治疗缺血性心脏病的有效方法．胚胎干细胞（ESC）在体外能诱导分化为心肌细胞，但同时会产生大量非心肌细胞．科研人员利用基因工程技术，使增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因在心肌细胞特异性表达，以利于从ESC分化来的细胞中筛选心肌细胞．该基因工程技术基本流程如图．请回答：

（1）过程①中，利用限制酶Mlu I、Nhe I处理以获得．
（2）过程②的目的是使基因在细胞中特异性表达．
（3）过程③中，从囊胚分离出，进行培养可获得ESC．
（4）进行过程④时，（能/不能）在饲养层细胞上进行．

如图表示一个正常女性与一个患血友病男性结婚，通过减数分裂产生配子精子H与卵细胞F结合形成的受精卵发育成为一个患血友病男孩的过程．请据图回答：

（1）图中A、D、E的名称依次是细胞、细胞和细胞．
（2）图中E、F、H细胞的染色体组成依次是、 和
（3）若G与F结合，则后代的基因型是，表现型是．
（4）若这对夫妇没有患白化病，但在家系调查中发现，男方的父亲患白化病而母亲正常，女方的父母均正常而弟弟患白化病，那么这对夫妇生育一个正常子女的几率是．

图示为应用生物工程获得人们需要的生物新品种或新产品的方案．请回答下列问题：
方案Ⅰ：抗虫基因

导入

棉花受体细胞→抗虫棉；
方案Ⅱ：prG基因

导入

免疫过的B细胞→体外培养→单克隆抗体；
方案Ⅲ：抗血栓基因

导入

山羊受精卵→早期胚胎

移植

受体母羊→抗血栓山羊；
（1）方案Ⅰ中，通常利用Ti质粒将抗虫基因导入棉花受体细胞，为了使抗虫基因顺利连接到受体染色体基因组中，抗虫基因通常位于Ti质粒的片段中．从分子水平检测抗虫棉是否培育成功的方法是：．
（2）推测方案Ⅱ中prG基因最可能的作用是．
（3）方案Ⅲ中的转抗血栓基因山羊可以通过分泌乳汁来生产抗血栓药物．在构建的相应基因表达载体中，抗血栓基因的首端必须含有使其仅能在山羊细胞中特异性表达的，人们通常将此类转基因动物称为．
（4）方案Ⅲ中的早期胚胎在移植入受体母羊子宫之前，必须对胚胎进行性别鉴定，一般是取处于时期的细胞进行检测．

普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶基因转入酵母菌中，经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种（过程如图甲所示）．

（1）图甲中，过程①需要的酶有．为达到筛选目的，平板内的固体培养基应加入．
（2）α-淀粉酶基因必须位于重组质粒的启动子和终止子之间的原因是．
（3）除了用选择培养基筛选工程菌之外，还可用DNA杂交技术直接鉴定带有重组质粒的酵母菌．具体操作如图乙所示，结合图乙回答一下问题．

利用PCR技术制备DNA探针，需加入才能是DNA探针具有放射性．如何根据放射性自显影结果做出判断．

在一个远离大陆且交通不便的海岛上，居民中患有甲种遗传病的占

1

1600

（基因为A、a）．岛上某家族系谱中，除患甲病外，还患有乙病（基因为B、b），两种病中有一种为红绿色盲，请据图回答问题：

（1）病为红绿色盲病，另一种遗传病的致病基因在染色体上，为性遗传病．
（2）Ⅲ-11的基因型为，Ⅲ-11的直系血亲关系有．（填编号）
（3）若Ⅲ-11与该岛一个表现型正常的女子结婚，则其孩子中患甲病的概率为．
（4）若Ⅲ-11与该表现型正常的女子已生育一患甲病的孩子，则再生一个孩子为甲病的几率是．
（5）Ⅱ-5和Ⅱ-6生育一个完全健康孩子的几率是．

如图表示某种绿色荧光蛋白基因表达载体的构建过程．绿色荧光蛋白基因有720个碱基对（bp），质粒有5369个碱基对（bp），其上酶切位点和标记基因如图．请回答：

（1）限制酶BamHI的识别序列和切割位点是G↓GATTC，则该酶切割DNA后形成的黏性末端是．过程③所需的工具酶是．
（2）②过程可以通过PCR技术进行，为了准确获取目的基因，设计引物对是关键．设计引物对的依据．
（3）基因工程中常用限制酶酶切后再电泳的方法进行重组质粒的鉴定和筛选，电泳时DNA片段的迁移速率与片段大小呈负相关．

①图中质粒经BamHⅠ、HindⅢ双酶切后进行电泳，出现了一条长度为5300bp的DNA条带（如图1），而重组质粒经BamHⅠ、HindⅢ双酶切，电泳后形成了两条长度分别为和的腿片段条带．
②图中质粒经BamHI单酶切后电泳图谱如图2．请在答题纸相应图中画出重组质粒用BamHI单酶切并电泳后条带所在的大致位置．
（4）该基因工程中的受体细胞无任何抗生素抗性，某同学用只含有氨苄青霉素的培养基筛选导入重组质粒的受体细胞．他能否成功？为什么？．

肿瘤坏死因子（TNF）是人体内免疫系统的组成部分，它在杀伤肿瘤细胞的同时也参与对关节的攻击，引起风湿性关节炎．肿瘤坏死因子抑制剂能与TNF结合，竞争性地抑制TNF与其受体结合，而TNF只有在与其受体结合后才能产生对关节的攻击作用，因此有医学专家利用肿瘤坏死因子抑制剂来治疗风湿性关节炎．西雅图的目标遗传公司（TGC）将编码肿瘤坏死因子抑制剂的基因导入腺相关病毒（AAV）中，再把AAV直接注射到病人的关节中，这样相当于送给病人一个持续不断地提供肿瘤坏死因子抑制剂的“定点仓库”，从而能长期有效地治疗风湿性关节炎．根据以上资料，分析回答问题．
（1）人体的免疫系统能通过释放TNF等而杀伤肿瘤细胞，这体现了免疫系统的功能．从资料中可知，风湿性关节炎是一种病．
（2）一旦肿瘤坏死因子抑制剂与TNF结合，TNF便不能与其受体结合，原因应是
（3）在该治疗方案中，AAV的作用是．肿瘤坏死因子抑制剂基因导入AAV过程中需要的工具酶是，重组AAV中外源基因的首端应该含有，它是识别和结合的部位．
（4）2007年，在接受这种治疗的美国人中，有一例因为严重的感染而死亡，使人们格外关注这种治疗方法的安全性问题．目前，基因治疗技术还处在初级阶段．在饱受慢性病的痛苦和接受存在一定危险性的治疗方法之间，如何做才是符合病人利益和伦理道德的？．