发光细菌检测法在检测生物毒性的方法中具有灵敏、简便的特点而被广泛采用.
实验原理:细菌代谢正常时,发光细菌的发光强度稳定,并可维持较长时间;当外界环境影响到发光细菌代谢时,发光会立即受到抑制,且抑制程度与影响物质浓度大小呈相关关系.
实验材料:明亮发光杆菌(海水细菌)、待测海水水样、2%的NaCl溶液、3%NaCl溶液、生物毒性测试仪(用于测定细菌发光强度)、全温振荡器、试管等.
Ⅰ.发光细菌的培养
发光细菌可以直接从海水中和海鱼的体表和内脏中分离,所采用的培养基成分为:胰蛋白胨0.5%,酵母膏0.5%,甘油0.3%,KH2PO40.1%,Na2HPO40.5%,NaCI3%,琼脂2%,pH6.5.
(1)发光细菌为
 
(自养型/异养型).取海鱼内脏放入灭菌培养皿中20℃培养12-18小时,在暗室中寻找发光点,用
 
刮取少许菌苔,在
 
培养基中采用
 
法获得纯化的发光菌株.使用前接种到
 
培养基中20℃下振荡培养10-12小时,增殖后用磷酸缓冲液稀释后备用.
Ⅱ.海水中重金属污染程度测定
a、配制发光菌悬液;
b、抑光反应:按照下表配置海水样品稀释液;
表1海水中重金属污染程度测定
试管编号 1 2 3 4 5
3%NaCl溶液(mL) 4.74 4.49 4.24 3.99
海水样品(mL) 0.25 0.50 0.75 1.00
发光菌悬液(mL) 0.01 0.01 0.01 0.01
混合液中海水浓度(%) 0.05 0.10 0.15 0.20
(2)表1中1号试管的作用是
 

(3)请在表格中填写适当的数据.
(4)利用生物毒性测试仪测定各试管的
 
(测定指标).
Ⅲ.五氯酚钠毒性测定
资料:五氯酚钠在水中以五氯苯酚阴离子和五氯苯酚分子平衡存在;五氯苯酚比五氯酚钠的极性小得多,更容易通过生物膜而与细菌细胞相接触.实验温度25℃下,pH为6.0、7.0、8.0、9.0时,pH每升高1个单位,分子态五氯苯酚所占的比例就下降一个数量级.
a、将五氯酚钠配成5个左右浓度等级,将接种后12h的菌液1-2mL用20-30mL3%NaCl溶液稀释混合,磁力搅拌10min 后,?取0.2mL加入比色管中,上下振荡5次,去塞,静置15min后用生物毒性测试仪测定发光强度.
b、计算相对发光率
相对发光率(RL)=测试管发光量mV/对照管发光量mV×100%
计算对应相对发光率减小50%的物质浓度(EC50)??
c.不同pH条件下,五氯酚钠毒性测定
发光细菌适宜生存的pH值为6.0-9.0
?表2    不同pΗ 值下五氯酚钠毒性测定结果/㎎?L-1
6.0 7.0 8.0 9.0
EC50值 1.74 2.41 9.39 15.94
(5)表2的结果与结论
 

(6)据资料分析可能的原因:
 
 0  106731  106739  106745  106749  106755  106757  106761  106767  106769  106775  106781  106785  106787  106791  106797  106799  106805  106809  106811  106815  106817  106821  106823  106825  106826  106827  106829  106830  106831  106833  106835  106839  106841  106845  106847  106851  106857  106859  106865  106869  106871  106875  106881  106887  106889  106895  106899  106901  106907  106911  106917  106925  170175 

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