如图表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列,图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列.现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG.请回答下列问题:

(1)用图1中的外源DNA(含有目的基因D)和图2中的质粒构建重组质粒需要使用限制酶和
 
.前者(酶)的专一性很强,其作用特点是
 

(2)应该使用限制酶BamHⅠ同时处理质粒、外源DNA,而不选择其他3种,原因在于
 
.(多选) A.若使用SmaⅠ或者MspⅠ会破坏目的基因.
B.若使用SmaⅠ切割质粒,能成功切开质粒得到粘性末端的可能很低.
C.若使用MboⅠ切割质粒,质粒上会有2处被切开,会将质粒切成两段不利于筛选.
D.使用限制酶BamHⅠ能保证目的基因和质粒获得相同的粘性末端,以便目的基因和运载体定向连接,不至于反向连接.
E.使用BamHⅠ切割质粒,质粒上会有1处被切开,破坏抗生素A抗性基因,保留抗生素B抗性基因,以便于将来筛选含目的基因的受体细胞.
F.只有使用BamHⅠ切割,才能保证质粒和目的基因上产生相同的粘性末端.
(3)若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换,那么基因D就突变为基因d.从杂合子分离出图1及其对应的DNA片段,用限制酶SmaⅠ完全切割,产物中共有
 
种不同DNA片段.若同时用限制酶MspⅠ、MboⅠ切割图2中的质粒,则可得到
 
个DNA片段.
(4)为了筛选出成功导入含目的基因D的重组质粒的大肠杆菌,一般可进行如下步骤筛选:
第一步:将大肠杆菌在含
 
的培养基上培养,得到如图3的菌落.
第二步:再将灭菌绒布按到培养基上,使绒布面沾上菌落,然后将绒布按到含
 
的培养基上培养,得到如图4的结果(空圈表示与图3对照无菌落的位置).
第三步:选出图3培养皿中的某些菌落进行培养,即可得到含重组质粒的大肠杆菌.请在图3中圈出含目的基因的重组质粒的大肠杆菌的菌落
以上筛选方式至少需要两步,其实还有其他更简单的操作方法.请阅读下列材料,回答问题.
大肠杆菌pUC118质粒的某限制酶唯一酶切序列,位于该质粒的lacZ基因中.lacZ基因中如果没有插入外源基因,便可表达出β-半乳糖苷酶.当培养基中含有A物质时,A物质便会被β-半乳糖苷酶水解成蓝色,大肠杆菌将形成蓝色菌落;如果lacZ基因中插入了外源基因,带有pUC118质粒的大肠杆菌便不能表达β-半乳糖苷酶,培养基中的A物质不会被水解成蓝色,大肠杆菌将形成白色菌落.pUC118质粒还携带了氨苄青霉素抗性基因.如图5是利用lacZ基因筛选重组质粒示意图.
(5)用图5中的培养基中筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌,制备时除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外还应加入物质应包括
 
(多选) A.伊红美蓝试剂  B.琼脂  C.A物质  D.氨苄青霉素  E.四环素  F.噬菌体
(6)将上述处理后的大肠杆菌置于图5中培养基上培养,以检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒,结果可能出现蓝色或者白色菌落,其中
 
色大肠杆菌菌落即为含重组质粒的目的菌.
草甘膦是一种广谱除草剂,其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成,最终导致植物死亡.但是,它的使用有时也会影响到植物的正常生长.目前,已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因,若将该基因转入植物细胞内,从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦.
取6株植物,其中,植物A和D对草甘膦敏感,B和E对草甘膦天然具有抗性,C和F则经过了转基因处理,但是否成功还未知.表为4种限制酶的识别序列和酶切位点,图1为含有目的基因的DNA片段及其具有的限制酶切点.据图回答下列问题:
限制酶MspⅠBamHⅠMboⅠSmaⅠ
酶切
位点
C↓CGG
GGC↑C
G↓GATCC
CCTAG↑G
↓GATC
CTAG↑
CCC↓GGG
GGG↑CCC
(1)若A-C浇清水,D-F浇的水中含有草甘膦,上述植物中,肯定能健康成长的是
 

(2)一个完整的基因表达载体除了目的基因、复制原点、启动子和终止子外,还应包括
 
.若需利用酶切法获得目的基因,最应选择的限制酶是
 
 

(3)假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中,但植物F仍没有表现出抗性,分析可能的原因
 

(4)图2甲是某目的基因(4.0kb,1kb=1000对碱基)与大肠杆菌pUC18质粒(2.7kb)重组的示意图.图2中Ap′是抗氨苄青霉素基因,lacZ是显色基因,其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧,其控制合成的物质能使菌落呈现蓝色.(图2乙中深色圆点即为蓝色菌落)

①图乙的培养基中含有氨苄青霉素,请判断图乙中所出现的白色和蓝色两种菌落中,何种会含有重组质粒.
 

②现用EcoRI酶切重组成功的质粒(重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRI的识别位点之间的碱基对忽略不计),酶切后进行电泳观察,会出现长度为
 
kb的片段.
以山东农业大学李铁坚教授为首的农业专家总结养猪技水,创立了新式生态大棚养猪法,也叫懒汉养猪法.
(1)懒汉养猪法充分利用锯末、农作物秸秆粉碎物等作为发酵床垫料.由于猪有拱地的习性,锯末、农作物秸秆粉碎物等就会与猪粪便混合发酵,培养有益菌供猪采食,减少饲料、节约用水等直接饲养成本,实现粪污零排放,无臭气、无污染.同时,还能生产优质肥料,用于改良土壤、促进农作物生长,主要遵循了
 
原理.懒汉养猪法使猪只恢复了自然习性,从发酵床中采食肉眼可见的大型白色菌丝.乳酸菌与该菌丝细胞相比,最主要的区别是
 
.料床中的各种有益菌之间的关系为
 
.在寒冷的冬季,发酵床表层的温度仍可维持25℃-30℃的水平,主要原因是
 

(2)现有发酵床混合菌种采自自然界,发酵效率较低.从瑞氏木霉cDNA文库中可获得高效的纤维素酶基因,有人将瑞氏木霉纤维素酶基因转入混合菌中,经筛选得到了可高效利用纤维素的工程混合菌菌种(过程如图甲所示).

(1)图甲中,为达到筛选目的,平板内的固体培养基应以
 
作为唯一碳源.①、②过程需要重复几次,目的是
 

(2)某同学尝试过程②的操作,其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示.该同学的接种方法是
 
;推测该同学接种时可能的操作失误是
 
 0  105321  105329  105335  105339  105345  105347  105351  105357  105359  105365  105371  105375  105377  105381  105387  105389  105395  105399  105401  105405  105407  105411  105413  105415  105416  105417  105419  105420  105421  105423  105425  105429  105431  105435  105437  105441  105447  105449  105455  105459  105461  105465  105471  105477  105479  105485  105489  105491  105497  105501  105507  105515  170175 

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