目前基因工程所用的质粒载体主要是以天然细菌质粒的各种元件为基础重新组建的人工质粒,pBR322质粒是较早构建的质粒载体,其主要结构如图一所示.请回答以下基因工程技术操作中的问题:

(1)构建人工质粒时不光要有抗性基因、复制原点等,还应该具备RNA聚合酶识别和结合的部位,以驱动目的基因转录,该部位称为
 

(2)获取目的基因后可以用PCR技术扩增.PCR仪器可以模拟DNA双链在体内的复制,所不同的是,PCR过程中的DNA聚合酶(taq酶)的
 
性比体内的DNA聚合酶强;而在PCR过程中通过加热(90-95℃)达到的结果,和体内DNA复制时所需
 
酶的作用相同.
(3)受体细胞不同,导入目的基因的方法也不同.如受体细胞是植物细胞,可选用
 
转化法;如受体细胞是细菌,则先用Ca2+处理,将其转化为一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,这种细胞称为
 
细胞.将人胰岛素基因导入大肠杆菌内且成功表达后,提取的产物还需进行体外加工和改良,因为大肠杆菌缺乏
 
(细胞器),无法加工形成胰岛素.
(4)pBR322分子中另有单个的BamHⅠ限制酶作用位点,现将经限制酶BamHⅠ处理后的质粒与用另一种限制酶BglⅡ处理后得到的目的基因,通过DNA连接酶作用恢复
 
键,成功地获得了重组质粒,这说明限制酶BamHⅠ和限制酶BglⅡ的酶切产物具有
 

(5)为了检测上述重组质粒是否导入原本无ampR和tetR的大肠杆菌,将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养,得到如图二的菌落.再将灭菌绒布按到培养基上,使绒布面沾上菌落,然后将绒布按到含四环素的培养基上培养,得到如图三的结果(空圈表示与图二对照无菌落的位置).与图三空圈相对应的图二中的菌落表现型是
 
,图三结果显示,多数大肠杆菌导入的是
 
质粒.
 0  103211  103219  103225  103229  103235  103237  103241  103247  103249  103255  103261  103265  103267  103271  103277  103279  103285  103289  103291  103295  103297  103301  103303  103305  103306  103307  103309  103310  103311  103313  103315  103319  103321  103325  103327  103331  103337  103339  103345  103349  103351  103355  103361  103367  103369  103375  103379  103381  103387  103391  103397  103405  170175 

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