科学家研究发现,一种植物激素--油菜素内酯能促进农药在植物体内的降解和代谢.研究人员发现,用油菜素内酯处理后,许多参与农药降解的基因(如图P450)的表达和酶活性都得到提高,在这些基因的“指导”下合成的蛋白酶能把农药逐渐转化为水溶性物质或低毒无毒物质,有的则被直接排出体外,某课题组进一步进行了如下的实验操作:

(1)上述油菜素内酯基因的扩增利用了PCR技术.其过程是:目的基因DNA
 
后解旋为单链;加入
 
与单链相互互补序列结合,然后在具有热稳定性的DNA聚合酶的作用下进行延伸,如此循环.
(2)基因工程的基本操作程序包括4个步骤:目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定.请根据上图,写出以上4个步骤的具体操作内容;
①目的基因的获取:
用限制酶获取油菜素内酯基因,利用PCR技术进行目的基因的扩增.
②基因表达载体的构建:
 

③将目的基因导入受体细胞:
 
处理细胞,再将
 
混合培养,完成转化过程;最后还需要
 
,筛选成功导入目的基因的菌株.
④目的基因的检测与鉴定:
本实验堆目的基因表达情况的检测与鉴定是
 
水平上的检测,具体步骤为:
①将等量筛选过的菌株分别接种到含农药与不含农药的土壤样品中培养;
②一段时间后,分别提取两个培养样品中的受体细胞,测定其数量;
③若
 
,则说明油菜素内酯基因表达成功,这样判断的原因是
 
 0  101336  101344  101350  101354  101360  101362  101366  101372  101374  101380  101386  101390  101392  101396  101402  101404  101410  101414  101416  101420  101422  101426  101428  101430  101431  101432  101434  101435  101436  101438  101440  101444  101446  101450  101452  101456  101462  101464  101470  101474  101476  101480  101486  101492  101494  101500  101504  101506  101512  101516  101522  101530  170175 

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