固定化酵母在发酵生产中得到了广泛应用.研究表明用2%海藻酸钠与4%的氯化钙所制得的固定化细胞能够达到最佳的效果.海藻酸钙能与柠檬酸钠反应,而被溶解.某研究小组为了探究固定化酵母菌与游离酵母增殖速率.请协助完成相关研究:
实验材料:干酵母粉、灭菌的酵母菌培养液、灭菌的固定化酵母增殖培养液、海藻酸钠、4%氯化钙溶液、5%柠檬
酸钠溶液、血球计数板,显微镜、蒸馏水
实验步骤:
①酵母菌的活化:在无菌条件下,向装有10mL酵母菌培养液的试管中接种适量的酵母,在28'C下培养48h后,离心取沉淀,再用无菌生理盐水稀释成较高浓度的菌悬液.
②固定化酵母细胞的制备:配制2%每藻酸钠溶液,灭菌冷却→
 
→用注射器造粒(直径约为3mm珠状颗粒)→常温下固定36h.
③固定化酵母的增殖:待固定化结束后,倒去CaCl2溶液,用无菌水洗涤2~3次;再将固定化凝胶珠分成两等份,取其中一份加到固定化酵母增殖培养液中,在28℃下振荡培养24h,得到固定化增殖酵母,
④固定化酵母增殖测定:将
 
放入一定体积的5%柠檬酸钠溶液中,振荡使凝胶珠完全溶解;再
 
后,用血球计数板计数凝胶球内包埋的菌数,比较酵母菌在载体中生长状况.
回答下列问题:
(1)完善实验步骤:
A.
 

B.
 

C.
 

(2)实验制作的凝胶珠直径不宜过大,这是因为凝胶珠直径过大
 
,实验中可以通过
 
对凝胶珠的大小进行控制.
(3)在将凝胶珠接种到酵母增殖培养液中之前,需要对凝胶珠用无菌水洗涤,其目的是
 

(4)为减少对培养液酵母菌数量测量的误差,应如何进行?
 

(5)试以固定化酵母为材料提出一个研究课题.
 
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