红细胞含有大量的血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成,血红蛋白的主要功能是携带氧气或二氧化碳,我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白,请回答下列有关问题:
(1)血红蛋白提取和分离的程度可分为四步:
 
 
 
和纯度鉴定.
(2)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集血红蛋白溶液.分离血红蛋白溶液时,将混合液离心后可看到试管中的液体分为4层:第一层为无色透明的
 
,第二层为
 
白色薄层固体,是物质的沉淀层,第三层是红色透明液体,是
 
的水溶液,第四层是其他杂质的暗红色沉淀物.
(3)收集的血红蛋白溶液在透析袋中可以经过透析,这就是样品的粗分离.
①透析的目的是
 
.②透析的原理是
 

(4)然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化,最后经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定.
下面是凝胶色谱法分离血红蛋白时样品的加入(图I)和洗脱(图Ⅱ)示意图,请据图回答下列问题.
a.在加样示意图中,正确的加样顺序是
 

b.用吸管加样时,应注意正确操作,分别是①待缓冲液降到与凝胶面齐平再加样.②贴着管壁加样
 

c.等样品完全进入凝胶后,才加入缓冲液洗脱.待
 
接近色谱柱底端时,用试管收集流出液,每5mL收集一管,连续收集.
①品纯化目的是
 

②血红蛋白呈现红色,这一特点对进行蛋白质的分离有什么意义?
 
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