Question

【题目】我国一科研团队将小麦液泡膜Na+/K+逆向转运蛋白基因（TaNHX2基因）转移到水稻细胞内，获得了转基因耐盐水稻新品种。图1是获取的含有目的基因的DNA片断，Sau3AI、EcoRI、BamHI为三种限制酶，图中箭头所指为三种限制酶的切点；图2是土壤农杆菌中用于携带目的基因的Ti质粒结构示意图。请分析回答：

（l）据图分析可知，要构建基因表达载体，需要用________限制酶对DNA片段和质粒进行切割，再用____连接。

（2）为了获得更多的目的基因用于实验研究，可以用小麦叶肉细胞的基因组为模板，利用TaNHX，基因的特异引物，通过________方法进行扩增，该方法用到的酶是____。

（3）常用农杆菌转化法将耐盐基因导入水稻细胞。先将耐盐基因插入Ti质粒的_________中，然后导入农杆菌中，再通过农杆菌侵染水稻细胞，将耐盐基因插入水稻细胞的_________上，最后通过植物细胞工程中的____技术获得转基因植株，从而使其遗传特性得以稳定维持和表达。

（4）为了检测实验成果，科研工作者在个体水平的检测方法是____。

Answer 1

【答案】EcoRI DNA连接酶 PCR Taq酶（或耐高温的DNA聚合酶） T-DNA 染色体DNA 植物组织培养 将转基因水稻种植在盐碱地上或用一定浓度的盐水浇灌观察结果

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）如图所示，用EcoRI酶切可获得目的基因，同时质粒上也具有EcoRI酶切位点，因此可用EcoRI限制酶对DNA片段和质粒进行切割，再用DNA连接酶将两个片段连接起来。

（2）在体外可用PCR扩增技术对目的基因进行扩增，PCR用的酶是耐热的Taq酶。

（3）在利用农杆菌转化法将目的基因导入水稻细胞（植物细胞）时，应该将耐盐基因插入Ti质粒的T-DNA上，经过转化作用进入水稻细胞，并将其插入水稻细胞染色体的DNA上，最后通过植物细胞工程中的植物组织培养技术获得转基因植株，从而使其遗传特性得以稳定维持和表达。

（4）耐盐目的基因在个体水平上的检测方法是：将转基因水稻种植在盐碱地上或用一定浓度的盐水浇灌观察结果。