Question

17．我国科学家独立研制的轮状病毒疫苗对婴幼儿感染性腹泻有很好的预防效果．轮状病毒是RNA病毒，表面的E蛋白为主要抗原，下面介绍疫苗生产的有关过程，回答下列问题：
（1）用轮状病毒的抗原E蛋白获得E基因（目的基因）过程需要借助蛋白质工程．构建完整的表达载体必须要含有启动子、终止子、复制原点和目的基因等结构．
（2）生产疫苗时可用微生物做受体细胞，则应采用Ca²⁺处理微生物细胞，使受体细胞处于感受态，从而将表达载体导入受体细胞；疫苗药物生产也可用乳腺生物反应器，那么导入目的基因的方法应采用显微注射．
（3）对健康幼儿进行该传染病免疫预防时，可选用基因工程生产的E蛋白作疫苗．对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒，与已知病毒进行核酸序列比较；或用抗E蛋白的抗体进行特异性结合检测．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）蛋白质工程的基本程序之一是根据中心法则逆推以确定目的基因的碱基序列，因此用轮状病毒的抗原E蛋白获得E基因（目的基因）过程需要借助蛋白质工程．基因表达载体的组成包括启动子、目的基因、标记基因和终止子等结构．
（2）将目的基因导入微生物细胞常用感受态转化法，即用Ca²⁺处理微生物细胞，使受体细胞处于易于吸收周围环境中DNA分子的感受态，从而将表达载体导入受体细胞；将目的基因导入动物细胞常用显微注射法．
（3）对健康幼儿进行该传染病免疫预防时，可选用基因工程生产的E蛋白作疫苗．对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒，与已知病毒进行核酸序列比较；或采用抗原-抗体杂交法，即用抗E蛋白的抗体进行特异性结合检测．
故答案为：
（1）蛋白质     启动子、终止子、复制原点
（2）感受态   显微注射
（3）E蛋白     已知病毒进行核酸序列      抗E蛋白的抗体

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节；识记蛋白质工程的基本过程，能结合所学的知识准确答题．