题目内容

【题目】某生物兴趣小组在学习了DNA的粗提取与鉴定实验后,尝试开展RNA的粗提取与鉴定实验。通过查阅资料,制订了以下的实验方案:

【实验课题】酵母RNA的提取和鉴定

【实验目的】1.从酵母中提取RNA;2.鉴定RNA。

【实验原理】微生物是工业上大量生产RNA的原料,其中以酵母尤为理想,因为酵母核酸中主要是RNA,DNA很少,菌体易收集,RNA易分离。RNA不溶于乙醇和无水乙醚。利用稀碱法(稀碱能使细胞壁溶解)或高盐法(高浓度的盐改变细胞膜的通透性)来释放RNA。RNA水解液(加硫酸、加热)+苔黑酚-FeCl3试剂加热直到沸腾1分钟,会呈现墨绿色。

【实验材料】干酵母粉、离心机、烧杯、试管、玻璃棒等;0.2%氢氧化钠、95%乙醇、无水乙醚、乙酸、10%硫酸溶液、苔黑酚-FeCl3试剂等。

【实验步骤】

①称6克干酵母

②加0.2%氢氧化钠45mL,沸水加热20分钟,搅拌,后加乙酸7滴

③离心10分钟后取上清液

④边搅拌边缓慢加95%乙醇并静置10分钟

⑤离心后先用95%乙醇洗两次,再用无水乙醚洗两次

⑥获得RNA粗制品

⑦RNA鉴定

请根据实验方案,思考并回答下列问题:

(1)酵母菌细胞中含有RNA的结构有 。酵母菌也是便于用来研究细胞呼吸不同方式的好材料,理由是 。

(2)实验步骤⑤中,离心后取 用乙醇、无水乙醚进行洗涤。

(3)RNA提取过程要注意温度的控制,在20~70℃的温度范围内停留的时间不能太长,其原因是 。

(4)稀碱法提取RNA须在沸水浴中进行的目的,一是 ,二是 ,以便获得更多更纯净的RNA。

(5)若用花椰菜来提取DNA,可用 瓦解细胞膜,然后充分研磨,实验中研磨速度要 。

【答案】

(1)细胞核、线粒体、核糖体、细胞质基质 酵母菌在有氧和无氧条件下都能生存,属于兼性厌氧型

(2)沉淀物

(3)分解核酸的酶在此温度范围内活性高,会使RNA降解

(4)使杂质蛋白质变性 使核酸水解酶失活,减少RNA的分解

(5)洗涤剂 缓慢

【解析】

(1)真核细胞中RNA在细胞核内合成,由核孔进入细胞质基质,tRNA分布在细胞质基质中,作用是能识别并转运氨基酸到核糖体上,rRNA为核糖体的组成成分,mRNA作为翻译的模板与核糖体结合,线粒体和叶绿体内也含有RNA,因此酵母菌细胞中含有RNA的结构有细胞核、线粒体、核糖体、细胞质基质。酵母菌是兼性厌氧型生物,在无氧和有氧条件下均可进行细胞呼吸,呼吸产物容易获得并进行定性测量,便于探究细胞呼吸方式。

(2)实验步骤⑤中,RNA分子大,且不溶于乙醇和无水乙醚,因此离心后存在于沉淀物中,且可以用乙醇、无水乙醚洗涤,除去杂质。

(3)RNA提取过程要注意温度的控制,在20~70℃的温度范围内停留的时间不能太长,其原因是分解核酸的酶在此温度范围内活性高,会使RNA降解。

(4)稀碱法提取RNA须在沸水浴中进行的目的,一是使杂质蛋白质变性,二是使核酸水解酶失活,减少RNA的分解,以便获得更多更纯净的RNA。

(5)若用花椰菜来提取DNA,可用洗涤剂瓦解细胞膜,但对DNA没有影响。然后充分研磨,实验中研磨速度要缓慢,防止DNA分子断裂。

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