题目内容
【题目】为了提高菊花抗冻能力，研究者从其他生物中克隆出抗冻基因C（左图），拟将其与质粒（右图）重组，再借助农杆菌导入菊花中。
回答下列问题：
（1）构建重组质粒时需要用到的工具酶为____。为使抗冻基因C在菊花细胞中高效表达，需要把目的基因片段插入表达载体的____之间。
（2）若获得的转基因植株（抗冻基因C已经整合到菊花的基因组中）抗冻能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是____。
（3）若要使目的基因在受体细胞中表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因是____、________（答出两点即可）。
（4）抗冻基因C的遗传特性能在菊花体内维持和表达的关键是____。
（5）科研工作者可以利用PCR技术获得更多的抗冻基因C，那么利用PCR技术获取目的基因的前提是____。
（6）菊花与提供抗冻基因的生物差异很大，但却通过基因重组后，菊花能够合成抗冻蛋 白，这是因为____。
【答案】限制性核酸内切酶和DNA连接酶（或限制酶和DNA连接酶） 启动子、终止子（没写全不得分） 目的基因的转录（或翻译异常） 目的基因无复制原点 目的基因无表达所需启动子 目的基因插入到了菊花细胞的染色体DNA上 要有一段已知目的基因的核苷酸序列 菊花和该生物共用一套遗传密码
【解析】
1、基因工程的基本工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体。
2、基因工程的基本操作程序有四步：①目的基因的获取、②基因表达载体的构建、③将目的基因导入受体细胞、④目的基因的检测与鉴定。
3、基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因
①启动子在基因的首段，它是RNA聚合酶的结合位点，能控制着转录的开始；
②终止子在基因的尾端，它控制着转录的结束；
③标记基因便于目的基因的鉴定和筛选。
（1）构建重组质粒时需要用限制酶切割质粒和目的基因，然后用DNA连接酶将目的基因和质粒连接在一起。启动子位于基因的首端，它是RNA聚合酶结合和识别的部位，有了它才能启动基因转录，终止子是转录终止的位点，所以为使抗冻基因C在菊花细胞中高效表达，需要把目的基因片段插入表达载体的启动子、终止子之间。
（2）若获得的转基因植株（抗冻基因C已经整合到菊花的基因组中）抗冻能力没有提高，说明目的基因没有正常表达，则其可能的原因是目的基因的转录或翻译异常。
（3）由于目的基因无复制原点，无表达所需启动子，所以若要使目的基因在受体细胞中表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞。
（4）抗冻基因C的遗传特性能在菊花体内维持和表达的关键是目的基因插入到了菊花细胞的染色体DNA上。
（5）利用PCR技术获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列。
（6）因为菊花和提供抗冻基因的生物共用一套遗传密码，所以抗冻基因能在菊花中合成抗冻蛋白。
