Question

12．苹果干腐病是一种名为茶藤子葡萄座腔菌真菌引起的疾病，病菌通常由枝条伤口入侵感染，在伤口处形成溃疡．某中学的科研小组计划分离出该真菌，并进行药物防治实验，为苹果干腐病的防治提供合理的建议．经过查阅资料，确定了分离时所用的PDA培养基配方，如表所示：

物质	马铃薯	葡萄糖	自来水	氯霉素
含量	200g	20g	1000mL	0.3g

该真菌在上述PDA培养基上生长时有特定的形态特征：辐射状白色匍匐菌丝，绒毛状．
（1）要获得菌落，则上表中还应添加的成分是琼脂（或凝固剂）．氯霉素的作用是抑制细菌等杂菌的生长．培养基的制备步骤包括计算、称量、溶化、灭菌、倒平板．等平板冷却凝固后，将平板倒置放置，以防止冷凝水污染培养基．
（2）用剪刀从染病枝条溃疡处剪取1×1cm²的患病组织，并用0.1%的升汞进行消毒，置于培养基中心，在合适条件下进行培养，共培养五组．待菌落形态特征稳定后，用平板划线法将该致病菌分别转移至含有等量0.5%苦水碱剂、40%福美砷、清水的上述PDA培养基中进行抗药性实验，并每隔24h记录一次最后划线区域的菌落数目．
①选取菌落数目稳定的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而导致遗漏的菌落数目．
②记录结果如下：

小组	0.5%苦水碱剂	40%福美砷	清水
菌落数目	2	8	17

从结果分析可知，0.5%苦水碱剂能很好的抑制该真菌的生长，适合防治苹果干腐病．

Answer 1

分析 微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．一般固体培养基中会加入琼脂作为凝固剂．
分析表格物质，氯霉素能够抑制细菌的生长，而真菌可以生存．

解答 解：（1）根据表格中培养基成分可知，培养基中加入氯霉素，氯霉素能够抑制杂菌生长，因此该培养基为选择培养基，而选择培养基为固体培养基，固体培养基需要加入琼脂作为凝固剂．培养基的制备步骤包括计算、称量、溶化、灭菌、倒平板．等平板冷却凝固后，将平板倒置放置，以防止冷凝水污染培养基．
（2）根据题干信息“每隔24h记录一次最后划线区域的菌落数目”，因此分离微生物的方法为平板划线法．
①选取菌落数目稳定的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而导致遗漏的菌落数目．
②分析表格数据可知，0.5%苦水碱剂作用后菌落数最少，因此0.5%苦水碱剂能很好的抑制该真菌的生长，适合防治苹果干腐病．
故答案为：
（1）琼脂（或凝固剂）    抑制细菌等杂菌的生长    灭菌    倒置放置
（2）平板划线     ①菌落数目稳定      ②0.5%苦水碱剂

点评 本题考查了微生物的分离和培养的有关知识，要求考生能够掌握培养基的成分以及制作步骤，能够根据题干以及表格信息准确答题．