Question

下图是将目的基因导入动物细胞，培育转基因动物的常用操作程序。根据图示过程和所学知识，将下面操作程序补充完整。

（1）构建基因表达载体：在构建基因表达载体时常要用到工具酶。常用的DNA连接酶有__________和___________，后者也可以用于平末端的连接。如果目的基因要在乳腺细胞中表达，基因表达载体构建时要将目的基因与__________、标记基因和终止子等组件重组在一起，载体一般要有一至多个限制酶切割位点便于     _________。
（2）获得足够数量的受精卵：为了获得足够数量的受精卵，先利用___________刺激供体雌性鼠超数排卵，然后从______________冲取______________，再完成体外受精。
（3）将目的基因导入细胞：确定目的基因是否整合到染色体上，一般需用______________做探针，与转基因小鼠细胞中提取的______________进行DNA分子杂交。
（4）早期胚胎培养：早期胚胎培养的培养液成分一般比较复杂，除一些无机盐和有机盐外，还需要添加___________、______________，氨基酸、核苷酸等营养成分，以及动物血清等物质。当胚胎培养到适宜的阶段时，可进行胚胎移植。
（5）胚胎移植：在胚胎移植前要对接受胚胎的受体进行_____________处理。移植后，还要对受体雌鼠进行_____________检查。
（6）胚胎干细胞形态上具有__________________________________________的特性，它在添加______________的培养液中可以维持不分化的状态。

Answer 1

（1）E·coliDNA连接酶（大肠杆菌DNA连接酶）    T₄-DNA连接酶
乳腺蛋白基因的启动子       目的基因的插入
（2）促性腺激素         输卵管         卵子（卵母细胞）
（3）放射性同位素标记（荧光分子标记）的目的基因（单链）   基因组DNA（核DNA）
（4）维生素     激素    （5）同期发情      妊娠
（6）体积小，细胞核大，核仁明显，      抑制因子

解析试题分析：
（1）基因工程中常用的DNA连接酶有E·coliDNA连接酶和T₄-DNA连接酶，其中T₄-DNA连接酶可以连接黏性末端和平末端；要想让目的基因在乳腺细胞中表达，需要把目的基因与乳腺蛋白基因的启动子、终止子等调控组件重组在一起，获得乳腺生物反应器；载体中要有一个或多个限制酶切割位点便于目的基因插入。
（2）超数排卵处理所用的激素为促性腺激素；对于小型动物鼠可以从输卵管中冲取卵子，再进行体外受精。
（3）要想检测目的基因是否整合到受体细胞的染色体上，需要用放射性同位素标记（荧光分子标记）的目的基因做探针，与转基因小鼠细胞中提取的核DNA分子进行DNA分子杂交，如果出现杂交带，说明导入成功。
（4）早期胚胎培养的培养液成分一般都比较复杂，除了一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸以及血清等。
（5）胚胎移植前要对接受胚胎的受体进行同期发情处理，保证胚胎移植前后所处的生理环境相同；移植后要进行妊娠检查。
（6）胚胎干细胞形态上具有体积小，细胞核大，核仁明显的特点；在培养液中添加抑制因子可以使胚胎干细胞增殖而不分化。
考点：本题考查基因工程和胚胎工程的有关知识，意在考查考生识记能力和理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。