Question

12．科学家将荒漠植物中的耐盐基因转移到莴苣细胞内，获得了转基因耐盐莴苣新品种．在培育过程中用到了EcORⅠ、SmaⅠ、NaeⅠ三种限制酶，如图依次表示EcORⅠ、SmaⅠ、NaeⅠ三种限制酶的识别序列及切割位点．请回答下列问题：

（1）限制酶主要是从原核（生物）中分离纯化而来的，限制酶能将双链DNA分子中的磷酸二酯键（化学键）断开．DNA分子经限制酶切割产生的片段末端有两种形式--黏性末端、平末端．
（2）请绘出EcORⅠ切割DNA分子后产生的末端，SmaⅠ和NaeⅠ切割形成的DNA片段之间能（填“能”或“不能”）连接形成重组DNA分子．
（3）将生长至四叶期的转基因幼苗转入高浓度食盐（NaCl）溶液中培养，进行耐盐试验，用非转基因幼苗作为对照，培养30天后观察现象．若转基因植株正常生长，则说明转基因植株获得了耐盐特性．

Answer 1

分析 基因工程的基本工具
1、“分子手术刀”--限制性核酸内切酶（限制酶）
（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的．
（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性．
（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端．
2、“分子缝合针”--DNA连接酶
（1）两种DNA连接酶（E•coliDNA连接酶和T₄DNA连接酶）的比较：
①相同点：都缝合磷酸二酯键．
②区别：E•coliDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T₄DNA连接酶来源于T₄噬菌体，可用于连接粘性末端和平末端，但连接效率较低．

解答 解：（1）限制酶主要是从原核中分离纯化而来的，限制酶能将双链DNA分子中的磷酸二酯键断开．DNA分子经限制酶切割产生的片段末端有两种形式：黏性末端、平末端．
（2）根据图中EcORⅠ限制酶的识别序列和切割位点可知，EcORⅠ切割DNA分子后产生的末端；SmaⅠ和NaeⅠ切割形成的DNA片段均为平末端，因此两种片段之间能连接形成重组DNA分子．
（3）将生长至四叶期的转基因幼苗转入高浓度食盐（NaCl）溶液中培养，进行耐盐试验，用非转基因幼苗作为对照，培养30天后观察现象．若转基因植株正常生长，则说明转基因植株获得了耐盐特性．
故答案为：
（1）原核       磷酸二酯键        黏性末端        平末端
（2）       能
（3）高浓度食盐（NaCl）溶液      转基因植株正常生长

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节问题，能结合所学的知识准确答题．