题目内容

将目的基因导入受体细胞是实施基因工程的第三步,有关说法不正确的是

A. 将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法

B. 转基因动物的培育过程中受体细胞一般选择受精卵

C. 显微注射技术是转基因微生物中采用最多的方法

D. 基因枪法是单子叶植物中常用的一种基因转化方法,但是成本较高

练习册系列答案
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如图为某种质粒表达载体简图,小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI、SamI的酶切位点,P为启动子,T为终止子,ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI、SamI在内的多种酶的酶切位点。外源DNA插入到ampR或tctR中会导致相应的基因失活(ampR表示氨苄青霉素抗性基因,tctR表示四环素抗性基因)。回答下列问题:

(1)目的基因主要是指编码蛋白质的基因,也可以是一些_________。在基因工程中使用的载体除质粒外,还有___________、动植物病毒等,它们来源不同,在大小、结构、复制以及插入片段大小上也有很大差别。

(2)一般为避免在构建重组质粒时出现自身环化,该质粒用限制酶切割时应该用________酶进行切割,切割过程中消耗了___________个水分子。目的基因进入受体细胞内,并在受体细胞内维持稳定和表达的过程,称之为_____________________。构建出来的基因表达载体在受体细胞内表达时,RNA聚合酶识别和结合位点是____________。

(3)若将此质粒用EcolR I酶切割后,与用EcolR I酶切获得的目的基因混合,加入DNA连接酶进行连接反应,用得到的混合物直接转化大肠杆菌(大肠杆菌本身不含该质粒),结果大肠杆菌有的未被转化,有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种,分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。其中,可在含氨苄青霉素的培养基上生存下来的大肠杆菌是____________,能在同时含氨苄青霉素和四环素的培养基上生存的是______________。

(4)假如该质粒载体为来自土壤农杆菌的Ti质粒,将其携带的抗虫基因整合到某植物细胞的染色体DNA上,将该细胞通过植物组织培养技术培育成植株后,发现其并无抗虫特性,其可能的原因是__________(答出1种情况即可)

某化工厂的污水池中含有一种有害的、难以降解的有机化合物A,研究人员利用以下两种方法获得了能高效降解化合物A的细菌。

Ⅰ 方法一:研究人员利用有机化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基成功筛选到能高效降解化合物A的细菌。实验的主要步骤如下图所示,请分析回答:

(1)培养基中加入化合物A的目的是__________________。

(2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的_______________。实验需要振荡培养,由此推测“目的菌”的代谢类型是_________________。

(3)在上述实验操作过程中,获得纯净“目的菌”的关键是________________________。

(4)转为固体培养时,常采用_____________的方法接种,获得单菌落后继续筛选。

(5)若研究“目的菌”的群体生长规律,将单个菌落进行液体培养,可采用显微直接计数法进行计数。若以一个大方格(体积为0.4mm3)有25个中方格的计数板为例进行计算,设五个中方格中总菌数为B,菌液稀释倍数为C,那么原菌液的菌群密度为_________________个/mL。

Ⅱ 方法二:研究人员通过化学方法合成了高效降解化合物A的某种酶的基因,利用PCR扩增后,采用一定方法导入细菌细胞中,经筛选、培养获得高效降解化合物A的细菌。请分析回答:

(1)在利用PCR扩增该酶的基因时,在扩增缓冲液中添加4种脱氧核苷三磷酸作为原料而不是脱氧核苷酸,从而使反应体系不需要再加入ATP提供能量,请推测PCR反应合成DNA子链时能量来源于______________________。

(2)假如PCR反应所用的引物含有放射性、模板不具有放射性,且引物不被切除,则经过n次循环,具有放射性的脱氧核苷酸链占总链数的比值为 _____________。

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