题目内容
【题目】干扰素基因缺失的个体免疫力严重下降。科学家利用胚胎干细胞（ES细胞）对干扰素基因缺失的患者进行基因治疗。请回答下列问题：
（1）胚胎干细胞是由___________中分离出来的细胞，在饲养层细胞上能够维持___________的状态。
（2）利用PCR技术扩增干扰素基因时，需在___________酶的作用下进行。PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但___________的引物需要设定更高的退火温度。如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有___________（填序号：①升高退火温度 ②降低退火温度 ③重新设计引物）。
（3）有人得到如图所示的含有目的基因的表达载体，但其不能在宿主细胞中表达目的基因产物，分析目的基因不能表达的原因是_________________________________。
（4）对改造后的ES细胞进行培养的过程中，为了防止污染，可在培养基中添加一定量的___________。
（5）干扰素的作用机理是：干扰素作用于宿主细胞膜上的相应受体，激活细胞核中基因表达产生多种抗病毒蛋白，其中有些蛋白可通过激活_____________________使病毒的RNA水解。
【答案】 早期胚胎或原始性腺 不分化 Taq酶（或热稳定DNA聚合酶） GC含量高 ②③ 目的基因插入在终止子的下游，目的基因不能被转录 抗生素 RNA (水解）酶
【解析】本题考查胚胎工程、基因工程的相关知识，解题要点是识记基因工程中PCR技术的原理和操作过程，识记细胞培养的条件。
（1）胚胎干细胞是早期胚胎（原肠胚期之前）或原始性腺中分离出来的一类细胞，简称ES。它具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。在饲养层细胞上能够维持不分化的状态。
（2）PCR技术是在较高温度下进行的，因此利用PCR技术扩增干扰素基因时，需在耐高温DNA聚合（或Taq或热稳定DNA聚合）酶的作用下进行；退火温度与时间，取决于引物的长度、碱基组成及其浓度，还有靶基序列的长度，如果引物中GC含量高，需要设定更高的退火温度；PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量 ④PCR循环条件，如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有降低退火温度 、重新设计引物等。
（3）构建目的基因表达载体时，目的基因应插入启动子和终止子之间，以利于目的基因的转录。
（4）ES细胞的培养基中除了所需要营养物质外，还应添加一定的抗生素，防止杂菌污染。
（5）酶有专一性，催化病毒RNA水解的酶是RNA水解酶。
[点睛]：本题以基因工程的应用为背景，考查学生分析题干信息，解答问题的能力，此类题目的解题技巧是：1. 认真阅读材料，分析其中的关键语句，充分联系教材，找到与教材的衔接点；2. 给合题文要求，对于联系教材的有关原理、概念等，尽可能用教材语言规范答题。
