题目内容
【题目】枯草芽孢杆菌盛产的蛋白酶，在生物医药和日用化工等生产领域具有重要的经济价值。为筛选枯草芽孢杆菌的蛋白酶高产株，将分别浸过不同菌株(a~e)的分泌物提取液及无菌水(们)的无菌圆纸片置于含某种高浓度蛋白质的平板培养基表面：在37℃温箱中放置2~3天，结果如图。如图是枯草芽孢杆菌的蛋白酶和其它酶的热稳定性数据(酶在不同温度下保温足够长的时间，再在酶活性最高的温度下测其酶活性)。请回答问题：
（1）在培养包括枯草芽孢杆菌在内的异养型微生物时，培养基营养成分应包括水、___________(填3种)，配制如图培养基的基本步骤是计算→称量→___________→灭菌→倒平板。
（2）大规模产业化生产应首选的菌株是___________(用字母回答)，菌株b提取物周围没有形成明显清晰区的可能原因是___________。
（3）在该蛋白的工业化生产过程中，通常需对发酵液在60~70℃保温一定时间，再制备酶制剂。在60~70℃保温一定时间的作用是___________。
（4）欲从a菌株中提取和分离相关蛋白酶，一般步骤为___________。分离出来的样品加入到___________进行洗脱，待蛋白质接近色谱柱底端时用试管收集流出液。
【答案】无机盐、碳源、氮源 熔化 a 不能合成蛋白酶(或合成的蛋白酶量不足或合成的蛋白酶不分泌或分泌量不足或分泌的蛋白酶活性低) 大幅度降低发酵液中其他酶的活性 样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定 凝胶色谱柱
【解析】
培养基的成分主要有碳源、氮源、水和无机盐等，此外，在培养微生物时还需要满足其生长的温度、pH和氧气等条件。某科研小组利用含某种高浓度蛋白质的培养基，筛选枯草芽孢杆菌的蛋白酶高产株，若培养基中出现的透明圈越大，则说明该菌分解蛋白质的能力越强，据此分析。
（1）在培养包括枯草芽孢杆菌在内的异养型微生物时，培养基营养成分应包括水、无机盐、碳源、氮源，配制图1培养基的基本步骤是：计算→称量→熔化→灭菌→倒平板。
（2）根据题意和图1分析可知：a周围的透明圈最大，说明分泌的蛋白酶最多，所以大规模产业化首选的菌株是a；菌株b提取物周围没有形成明显清晰区，原因可能是：①不能合成蛋白酶或合成的蛋白酶量不足，或②合成的蛋白酶不分泌或分泌量不足，或③分泌的蛋白酶活性低。
（3）根据图2分析可知：在60～70℃时，其它酶的相对活性明显比蛋白酶的相对活性低，所以保温一定时间的作用是大幅度降低发酵液中其他酶的活性。
（4）欲从a菌株中提取和分离相关蛋白酶，一般步骤为：样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定。分离出来的样品加入到凝胶色谱柱进行洗脱，待蛋白质接近色谱柱底端时用试管收集流出液。
