题目内容
【题目】某植物蛋白酶抑制剂基因是重要的抗虫基因，该基因转录的mRNA下游序列已知，但其上游序列未知。现利用PCR等技术扩增该基因，原理如下图所示，其中①③表示有关过程，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ表示有关物质。请回答。
（1）过程①反应体系中，需要加入___________种引物，还需加入___________酶，生成杂交键物质Ⅰ。
（2）利用DNA末段转移酶催化过程②，使cDNA单链左侧末端増加十多个腺嘌呤脱氧核苷酸序列[AAA(A) n]，其目的是便于后续引物设计，进而有利于过程③获得目的基因序列，过程③反应体系需要添加的新引物序列是___________。
（3）与物质Ⅲ的化学组成相比，物质Ⅰ的不同之处在于Ⅰ中含有___________；与过程③相比，过程①中碱基配对方式的不同之处是___________。
（4）在物质Ⅲ的两端通常还需增加___________识别序列，以便与相应的载体重组，再利用Ca2+处理大肠杆菌，使其成为___________细胞，以利于将重组质粒导入细胞。
【答案】 一 反转录（或逆转录） TTT(T)n 核糖尿嘧啶 U—A 限制酶 感受态
【解析】
据图分析，过程①表示逆转录过程，需要逆转录酶的催化；过程②表示利用DNA末段转移酶使得cDNA单链左侧末端増加十多个腺嘌呤脱氧核苷酸序列（AAA(A) n）过程；过程③是cDNA单链获得双链DNA的过程。
（1）根据以上分析已知，过程①表示逆转录过程，需要逆转录酶的催化，由于该过程是以单链的mRNA为模板的，因此该过程只需要一种引物。
（2）由于过程②在cDNA单链左侧末端増加了十多个腺嘌呤脱氧核苷酸序列[AAA(A) n]，根据碱基互补配对原则，过程③反应体系需要添加的新引物序列是TTT(T)n。
（3）据图分析可知，物质Ⅰ的两条链分别是RNA链和DNA链，而物质Ⅲ的两条链都是DNA链，因此物质Ⅰ特有的化学成分是核糖和尿嘧啶；过程①是逆转录，过程③是DNA复制，因此过程①中碱基配对方式的不同之处是U—A。
（4）物质Ⅲ两端需要加上限制酶的识别序列，以便与相应的载体重组；利用Ca2+处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞，以利于将重组质粒导入细胞。
