题目内容
（15分）
Ⅰ．下面是DNA粗提取与鉴定实验设计中[去除滤液中的杂质]的三种方案：
回答下列有关问题：
（1）方案一中将含DNA的滤液不断改变溶液浓度，是利用了DNA在NaCl溶液中溶解度不同的原理，下图中浓度N的数值为 mol/L。
（2）方案二中直接在滤液中加入嫩肉粉的作用是 。
Ⅱ．茶油不是芳香油（其香味是某些酯的香味），但其提取过程与橘皮油的提取非常相似，下面是茶油的提取实验设计：
（1）蒸粉的主要作用是 。
（2）与橘皮油的提取实验设计比较，不同点是橘皮油的提取过程中需要用石灰水浸泡橘皮，在压榨过程中需要加入相当于橘皮质量0．25%的NaHCO3
和5%的Na2SO4，原因分别是 ， 。
Ⅲ．（1）萃取胡萝卜素时用石油醚作萃取剂效果较好，原因是石油醚 。
（2）提取的胡萝卜素用纸层析法进行检测，检测开始时的图解如右图（2cm处为样品，A、D为标准样品，B、C为萃取样品），分析检测的结果，下列分析正确的有（ ）（3分）
A．若样品B、C有与A、D平齐的色素点，则说明萃取样品中含有B－胡萝卜素，否则说明萃取样品中不含B－胡萝卜素
B．若样品B、C含有与A、D不平齐的色素点，则说明萃取样品中含有不同于B－胡萝卜素的色素
C．若四处样品均
未出现色素点，最可能是石油醚没及了点样
D．若样品B、C有与A、D平齐的色素点，则此平齐色素点对应色素在石油醚中溶解度相同
Ⅰ．（1）0．14
（2）嫩肉粉中含蛋白酶，能分解蛋白质，不分解DNA
Ⅱ．（1）提高出油率
（2）去果蜡果胶，防滑脱，提高出油率 使橘皮油与水分离
Ⅲ．（1）沸点高、能溶解胡萝卜素且不与水混溶
（2）ABCD（3分）
解析
研究人员从血管内皮瘤中发现了一种新的血管增生抑制剂——内皮抑素，它能有效地抑制血管增生。下面是获得重组内皮抑素的方法，请分析回答下列问题。
（1）从肝细胞中分离出相应的RNA，经________获得内皮抑素基因，再经________进行扩增，以获得更多的目的基因。
（2）扩增的目的基因与pUC18质粒(如图所示)都用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ进行双酶切，然后用DNA连接酶进行连接，构建重组质粒。双酶切避免了目的基因与载体________连接，还减少了目的基因与目的基因、载体与载体的连接，提高了重组质粒的比例。
（3）大肠杆菌pUC18质粒的LacZ基因中如果没有插入外源基因，LacZ基因便可表达出β半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和Xgal时，Xgal便会被β半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落。反之，则形成白色菌落。选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入的物质有________和氨苄青霉素。成功导入重组质粒的大肠杆菌在培养基中形成________颜色的菌落，原因是__________________。
（4）从选择培养基中挑取所需的单个菌落接种于液体培养基中培养，获得粗提表达产物。将等量毛细血管内皮细胞接种于细胞培养板，37 ℃培养。将等量不同浓度的粗提表达产物加进培养孔中，72 h后在显微镜下观察细胞存活情况并统计(或记录)活的内皮细胞数目，实验结果如下表所示。
| 粗提表达产物浓度/(μg·mL－1) | 0 | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 |
| 活的内皮细胞数目(×102) | 12 | 6 | 2 | 1 | 0.5 | 0.5 |
_____________________________________________________________。
研究人员从血管内皮瘤中发现了一种新的血管增生抑制剂——内皮抑素，它能有效地抑制血管增生。下面是获得重组内皮抑素的方法，请分析回答下列问题。
（1）从肝细胞中分离出相应的RNA，经________获得内皮抑素基因，再经________进行扩增，以获得更多的目的基因。
（2）扩增的目的基因与pUC18质粒(如图所示)都用EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ进行双酶切，然后用DNA连接酶进行连接，构建重组质粒。双酶切避免了目的基因与载体________连接，还减少了目的基因与目的基因、载体与载体的连接，提高了重组质粒的比例。
（3）大肠杆菌pUC18质粒的LacZ基因中如果没有插入外源基因，LacZ基因便可表达出β半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和Xgal时，Xgal便会被β半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落。反之，则形成白色菌落。选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入的物质有________和氨苄青霉素。成功导入重组质粒的大肠杆菌在培养基中形成________颜色的菌落，原因是__________________。
（4）从选择培养基中挑取所需的单个菌落接种于液体培养基中培养，获得粗提表达产物。将等量毛细血管内皮细胞接种于细胞培养板，37 ℃培养。将等量不同浓度的粗提表达产物加进培养孔中，72 h后在显微镜下观察细胞存活情况并统计(或记录)活的内皮细胞数目，实验结果如下表所示。
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粗提表达产物浓度/(μg·mL－1) |
0 |
2 |
4 |
6 |
8 |
10 |
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活的内皮细胞数目(×102) |
12 |
6 |
2 |
1 |
0.5 |
0.5 |
实验结果说明_____________________________________________________
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