Question

由于人突变细胞中含胸苷激酶（TK）而缺乏HGPRT酶，小鼠正常细胞中含HGPRT酶而缺乏TK，两种细胞均不能在HAT培养基中生长，但可在普通培养基中生长．利用上述两类细胞融合获得杂种细胞，在杂种细胞传代过程中，鼠的染色体被保留下来，人的染色体随机丢失，以至最后只剩一条或几条人染色体（如下图，图中数字代表保留的人染色体编号）．科研人员运用这一方法确定了胸苷激酶基因所在的染色体．分析回答：
（1）人、鼠细胞融合的原理是

 

．与植物原生质体融合过程相比，过程A特有的诱导方法是

 

．
（2）动物细胞培养过程中，培养液中添加一定量的抗生素的目的是

 

，培养箱中充入5%的CO₂气体的主要作用是

 

．
（3）过程B用HAT培养基进行培养，目的是

 

．
（4）为了使人的全部染色体分别包含于各种不同的人鼠杂交细胞中，人鼠融合细胞应在

 

（填“HAT”或“普通”）培养基中传代培养．为检查杂种细胞中含有的人染色体数目和形态，最好选取

 

（时期）的杂种细胞进行观察．
（5）若将某次实验获得的各种人鼠杂种细胞分别在HAT培养基中培养，一段时间后，发现在HAT培养基中只有A、B、C三种杂种细胞能够生长，检查杂种细胞中保留的人染色体情况如下表（表中“+”表示有相应染色体，“-”表示无相应染色体）：

杂种细胞	保留的人染色体
	2号	3号	5号	9号	12号	17号	21号
A	+	+	+	+	-	+	-
B	-	+	-	-	+	+	-
C	+	-	+	-	+	+	+

根据表中信息，可推测人细胞中胸苷激酶基因位于

 

号染色体上．

Answer 1

考点：细胞融合的概念及方法,动物细胞与组织培养过程

专题：

分析：1、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较：

项目	细胞融合原理	细胞融合方法	诱导手段	用途
植物体细胞杂交	细胞膜的流动性，（细胞的全能性）	去除细胞壁后诱导原生质体融合	离心、电刺激、聚乙二醇等试剂诱导	克服远缘杂交不亲和，获得杂交植株
动物细胞融合	细胞膜的流动性	使细胞分散后，诱导细胞融合	离心、电刺激、聚乙二醇、灭活病毒等试剂诱导	制备单克隆抗体的技术之一

2、动物细胞培养的条件：（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物．
（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质．
（3）温度和PH：36.5℃±0.5℃；适宜的pH：7.2～7.4．
（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO₂（维持培养液的PH）．
3、分析表格：A、B、C三种杂种细胞共有的染色体是17号染色体．

解答： 解：（1）动物细胞融合的原理是细胞膜具有一定的流动性．植物原生质体融合的诱导方法有物理法和化学法，而诱导动物细胞融合的方法有物理法、化学法和生物法，因此与植物原生质体融合过程相比，过程A特有的诱导方法是生物法，即用灭活的病毒处理．
（2）动物细胞培养过程中，培养液中添加一定量的抗生素的目的是防止杂菌污染，培养箱中充入5%的CO₂气体的主要作用是维持培养液适宜的pH．
（3）过程B用HAT培养基进行培养，目的是筛选出人鼠融合细胞（杂种细胞）．
（4）突变细胞和正常细胞都不能在HAT培养基上生长，但都能在普通培养基上生长，因此为了使人的全部染色体分别包含于各种不同的人鼠杂交细胞中，人鼠融合细胞应在普通培养基中传代培养．有丝分裂中期，细胞中染色体形态稳定、数目清晰，是观察染色体形态和数目的最佳时期．
（5）在HAT培养基中只有A、B、C三种杂种细胞能够生长，而A、B、C三种杂种细胞共有的染色体是17号染色体，据此可推知人细胞中胸苷激酶基因位于17号染色体上．
故答案为：
（1）细胞膜具有一定的流动性   用灭活的病毒处理
（2）防止杂菌污染   维持培养液适宜的pH
（3）筛选出人鼠融合细胞（杂种细胞）
（4）普通   有丝分裂中期
（5）17

点评：本题结合图表，考查动物细胞工程的相关知识，要求考生识记动物细胞融合的方法，能对动植物细胞融合进行比较；识记动物细胞培养的条件，能结合图表中信息准确答题．