Question

为了解基因结构，通常选取一特定长度的线性DNA分子，先用一种限制酶切割，通过电泳技术将单酶水解片段分离，计算相对大小；然后再用另一种酶对单酶水解片段进一步降解，分析片段大小．下列是某小组进行的相关实验．

已知一线性DNA序列共有5 000bp（bp为碱基对）	第一步水解	产物（单位：bp）	第二步水解	产物（单位：bp）
	A酶切割	2 100	第一步水解产物分离后， 分别用B酶切割	1 900　200
		1 400		800　600
		1 000		1 000
		500		500
	B酶切割	2 500	将第一步水解产物分离后， 分别用A酶切割	1 900　600
		1 300		800　500
		1 200		1 000　200
	经A酶和B酶同时切割	1 900　1 000　800　600　500　200

（1）该实验设计主要体现了

 

原则．
（2）由实验可知，在这段已知序列DNA分子上，A酶和B酶的识别位点分别为

 

个和

 

个．
（3）根据表中数据，请在图1中标出相应限制性酶的酶切位点．
（4）已知BamH 与BglⅡ的识别序列及切割位点如图2所示，用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BamHⅠ和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，若干循环后和

 

序列明显增多，该过程中DNA连接酶催化

 

键的形成．
（5）一个基因表达载体的组成除了目的基因外，还必须有

 

、

 

及标记基因．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术

专题：

分析：限制性核酸内切酶是可以识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶，简称限制酶．由表格分析可知A酶切割后有4段产物，说明酶A有3个切割位点；B酶切割后有3段产物，说明酶B有2个切割位点．

解答： 解：（1）设计实验的基本原则要有对照实验，．
（2）A酶切割后形成4段，所以有3个识别位点，B酶切割后形成3段，所以有2个切割位点．
（3）由表中酶切割后片段长度可知，1900+600=2500，800+500=1300，1000+200=1200，所以连接如图所示．．
（4）图中DNA两片段经酶切后共得到四个片断，切割后形成的黏性末端相同，其中有二个片段组成了已知序列，则另一序列必为剩余的二个片段组成．DNA连接酶催化的是磷酸二酯键．
（5）图中DNA两片段经酶切后共得到四个片断，切割后形成的黏性末端相同，其中有二个片段组成了已知序列，则另一序列必为剩余的二个片段组成．DNA连接酶催化的是磷酸二酯键．
故答案为：
（1）对照（单一变量）
（2）3　2
（3）
（4）磷酸二酯
（5）启动子　终止子

点评：本题考查基因工程，意在考查考生能从课外材料中获取相关的生物学信息，并能运用这些信息，结合所学知识解决相关的生物学问题．