题目内容
如图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”示意图，所用载体为质粒A。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，质粒A导入细菌B后，其上的基因能得到表达。请回答下列问题：
（1）人工获得目的基因的途径一般有哪两条？
（2）如何将目的基因和质粒相结合形成重组质粒（重组DNA分子）？
（3）目前把重组质粒导入细菌细胞时，效率还不高；导入完成后得到的细菌，实际上有的根本没有导入质粒，有的导入的是普通质粒A，只有少数导入的是重组质粒。此处可以通过如下步骤来鉴别得到的细菌是否导入了质粒A或重组质粒：将得到的细菌涂布在一个有氨苄青霉素的培养基上，能够生长的就是导入了质粒A或重组质粒，反之则没有。使用这种方法鉴别的原因是________。
（4）若把通过鉴定证明导入了普通质粒A或重组质粒的细菌放在含有四环素的培养基上培养，会发生的现象是________。原因是________。
（5）导入细菌B细胞中的目的基因成功表达的标志是什么？
答案：
解析：
解析：
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[答案]（1）、（2）、（5）见以上解析。（3）普通质粒A和重组质粒都含有氨苄青霉素基因。（4）现象：有的能生长，有的不能生长。原因导入普通质粒A的细菌能生长，因为普通质粒A上有抗四环素基因；导入重组质粒的细菌不能生长，因为目的基因插在抗四环素基因中，结构被破坏。 [解析]此题是对基因操作四步骤比较全面的考查，而且注意联系实际。 （ 1）据课本内容可知，人工获得目的基因的两条途径是：①将从细胞中提取分离出的以目的基因为模板转录成的mRNA 单链DNA 双链DNA；②据蛋白质中氨基酸序列 mRNA中碱基序列DNA碱基序列 目的基因。
（ 2）将目的基因和质粒相结合形成重组质粒的过程是：①用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个有粘性末端的切口；②用同种限制酶切断目的基因，产生相同的粘性末端；③将切下的目的基因片段插入到质粒的切口处，再加入适量的DNA连接酶，使质粒与目的基因结合成重组质粒。（ 3）检测质粒或重组质粒是否导入受体细胞，均需利用质粒上某些标记基因的特性，即对已经导入质粒或重组质粒处理的、本身无相应特性的受体细胞进行检测，根据受体细胞是否具有相应的特性来确定。本题利用质粒上抗四环素和抗氨苄青霉素这两个特性以及它们在质粒上的位置进行目的基因是否导入受体细胞的检测。抗氨苄青霉素这种选择培养基培养经过导入质粒处理的受体细胞，凡能生长的则表明质粒导入成功；不能生长的则无质粒导入。（ 4）抗四环素基因不仅在质粒上，而且它的位置正是目的基因插入质粒之处，因此有目的基因插入质粒形成重组质粒时时，此处的抗四环素基因的结构和功能就会被破坏，当然含重组质粒的受体细胞就不能在含四环素的培养上生长，而质粒上无目的基因插入的，四环素基因结构是完整的，这种受体细胞就能在含四环互素的培养基上生长。（ 5）基因成功表达的标志是受体细胞通过转录、翻译过程合成出相应的蛋白质，即人的生长激素。 |
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