Question

18．在农业生产中发现一种广泛使用的除草剂（含氮有机化合物）在土壤中不易降解，长期使用可污染土壤．为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）．

（1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理．
（2）要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，上述培养皿中培养基为固体培养基．对培养基进行灭菌，常采用的方法是高压蒸汽灭菌．实验操作者的双手用70%酒精消毒．
（3）在第2次及其后划线总从上次划线末端开始的原因是划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少（每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落）
（4）培养后发现，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是培养基中缺少这些细菌可利用的氮源或有氧条件抑制了这些细菌的生长．
（5）在固体培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是氮气，有透明带菌落利用的氮源主要是该除草剂，据此可筛选出目的菌．

Answer 1

分析 据图分析：该实验是从土壤中筛选分离能降解除草剂的微生物的过程．这样的实验要将土壤稀释处理，以除草剂为唯一的氮源进行处理筛选土壤微生物，以菌落计数法进行统计计数．

解答 解：（1）1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理．
（2）从物理性质方面来看，题图培养皿中培养基属于固体培养基；从用途方面来看，该培养皿中培养基属于选择培养基．对培养基进行灭菌，常采用的方法是高压蒸汽灭菌．实验操作者的双手用70%酒精消毒．
（3）在作第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线的原因是（划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少），每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落．
（4）在以该除草剂为唯一氮源的培养基上，不能降解该除草剂的细菌（除具有固氮能力的细菌外）是不能生长的．
（5）无透明带菌落利用的氮源主要是氮气，含一定量该除草剂的培养基不透明，形成透明圈是由于该除草剂被某些细菌降解．
故答案为：
（1）稀释
（2）固     高压蒸汽灭菌  70%酒精
（3）划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少（每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落）
（4）培养基中缺少这些细菌可利用的氮源
（5）氮气   该除草剂

点评 解答此类题目的关键是对土壤中微生物的分离这个实验的熟练掌握，和在微生物实验中的无菌操作相关知识的熟练应用．