Question

14．石油污染土壤的微生物修复技术以效率高、治理费用低和现场可操作性强的特点得到广泛研究和应用．回答相关问题：
（1）土壤中含有分解石油的多种微生物，向多孔结构的污染土壤中通入空气，可使微生物的代谢（或有氧呼吸）增强，同时由于石油主要含有碳和氢，因此还需加入适量含氮和磷元素的物质促进微生物的生长繁殖，进而加快石油污染物的降解．
（2）为了得到能够分解石油的单一假单胞菌（细菌的一种），所用的培养基只能以石油为唯一碳源；纯化菌株常用平板划线法或稀释涂布平板法．
（3）土壤中分解石油的微生物数量直接影响治理的效果，因此常开展计数工作．实际操作中通常选用一定稀释范围的土壤样品液进行培养，目的是保证获得菌落数为30-300的平板进行计数，这种方法统计的结果＜（填“＞”或“=”或“＜”）活菌的实际数目，原因是两个或多个细菌细胞连在一起时，平板上只能观察到一个菌落．

Answer 1

分析 1、培养基按功能分：

种类	制备方法	特征	用途
选择培养基	培养基中加入某种化学成分	根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率	加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌
鉴别培养基	加入某种试剂或化学药品	依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计	鉴别和区分菌落相似的微生物伊红和美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌

2、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
3、统计菌落数目的方法
（1）显微镜直接计数法
 ①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法：用计数板计数； ③缺点：不能区分死菌与活菌．
（2）间接计数法（活菌计数法）
 ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌．通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌．
②操作
a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性．
b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数．
③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数．

解答 解：（1）土壤中含有分解石油的多种微生物，向多孔结构的污染土壤中通入空气，可使微生物的代谢（或有氧呼吸）增强，同时由于石油主要含有碳和氢，因此还需加入适量含氮和磷元素的物质促进微生物的生长繁殖，进而加快石油污染物的降解．
（2）要得到能够分解石油的单一假单胞菌（细菌的一种），应该用以石油为唯一碳源的选择培养基；纯化菌株常用平板划线法或稀释涂布平板法．
（3）实际操作中通常选用一定稀释范围的土壤样品液进行培养，目的是保证获得菌落数为30-300的平板进行计数；由于两个或多个细菌细胞连在一起时，平板上只能观察到一个菌落，因此采用稀释涂布平板法计数的结果偏小．
故答案为：
（1）代谢（或有氧呼吸）         氮和磷
（2）石油      平板划线法     稀释涂布平板
（3）30-300＜两个或多个细菌细胞连在一起时，平板上只能观察到一个菌落

点评 本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记培养基的种类、成分及功能；识记接种微生物常用的两种方法；识记计数微生物的方法及注意事项，能结合所学的知识准确答题．