Question

1．pBR322质粒是基因工程中经常选用的工具，如图Ⅰ所示．目的基因如果插入质粒的某抗性基因中，将使该基因失活．为了检查运载体是否导入原本无Amp^r 和Tet^r的大肠杆菌，将大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养，得到如图Ⅱ的菌落．再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图Ⅲ的结果（空圈表示与Ⅱ对照无菌落的位置）．
（1）pBR322质粒在基因工程中的作用是作为运载体．

（2）如图是pBR322质粒上被某种酶识别的一段特定序列．a处被切割后，产生的暴露出来的单链碱基序列是-TGCA或ACGT-．如果要从生物细胞中分离目的基因，首先需要进行基因定位，然后再用上述酶切割．将目的基因与质粒连接起来的酶作用于图中的a处．
（3）与图Ⅲ空圈相对应的图Ⅱ中的菌落表现型是能抗氨苄青霉素，但不能抗四环素，由此说明目的基因插入了Tet^r中．

Answer 1

分析 1、目的基因导入受体细胞后通过标记基因进行筛选，Ⅲ中空圈处表示与Ⅱ对照无菌落的位置，形成的原因是抗生素的选择作用，如抗性基因被破坏则细菌不能生存．
2、转录的起始位置位于模板链上的碱基序列TAC（因为起始密码子是AUG）．

解答 解：（1）基因工程中通常用质粒作运载体．
（2）a处被切割后，上侧链暴露出来的单链碱基序列是-TGCA，下侧链暴露出来的单链碱基序列是ACGT-；要从细胞中分离目的基因，首先要进行基因定位，然后用限制酶将目的基因切割下来，通过DNA连接酶将目的基因与质粒的黏性末端连接起来，形成磷酸二酯键，即连接a处．
（3）大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上培养进行筛选，所以培养基是选择培养基；空圈表示与Ⅱ对照无菌落的位置，Ⅱ培养基中加入含氨苄青霉素，Ⅲ培养基中加入四环素，所以空圈处表示能抗氨苄青霉素，但不能抗四环素，所以目的基因插入在抗四环素基因中，即Tet^r中．
故答案为：
（1）作为运载体        
（2）-TGCA或ACGT-基因定位     a  
（3）能抗氨苄青霉素，但不能抗四环素      Tet^r

点评 本题考查了基因工程技术应用的相关知识，意在考查考生的识图能力和分析理解能力，解题关键：①理解空圈形成的原因；②正确识图，会从图3中找出转录的起始位置．