题目内容

12．回答有关生物工程问题．
普通烟草转入抗盐基因培育抗盐烟草的过程如图所示．已知含抗盐基因的DNA和质粒上均有salⅠ、HindⅢ、BamHⅠ酶切位点，质粒上另有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因．

（1）构建重组质粒时，应选用限制酶salⅠ、HindⅢ酶对含抗盐基因的DNA和质粒进行切割，以保证它们定向连接．限制酶切断的是DNA分子中特定部位的两个脱氧核苷酸之间的键，具体说就是脱氧核糖和磷酸之间的键．
（2）如果目的基因直接注入烟草细胞，一般会被烟草细胞核酸酶分解．质粒的作用是运载体．
（3）切割后的目的基因与质粒由DNA连接酶连接成重组质粒．筛选导入重组质粒的细菌，应在其培养基中加入分别加入氨苄青霉素、四环素，理由是添加青霉素的培养基中成活，四环素中不成活的为重组质粒．因为重组质粒带有抗氨苄青霉素基因，而四环素基因被破坏．
（4）从个体水平鉴定抗盐转基因烟草是否培育成功的方法是用一定浓度盐水浇灌或移栽到盐碱地中．

分析 分析题图：含抗盐基因的DNA和质粒上均有salⅠ、HindⅢ、BamHⅠ酶切位点，但BamHⅠ酶切位点位于目的基因上，用该酶切割会破坏目的基因，因此选用salⅠ酶和HindⅢ酶对含抗盐基因的外源DNA和质粒进行切割；质粒含有抗氨苄青霉素基因和抗四环素基因，但重组质粒只含氨苄青霉素抗性基因．

解答 解：（1）分析题图可知，构建重组质粒时，应选用salⅠ酶和HindⅢ酶对含抗盐基因的外源DNA和质粒进行切割，这样会形成不同的黏性末端，可以防止目的基因、质粒的自身连接，以保证目的基因和质粒的定向连接．限制酶切断的是DNA分子中特定部位的两个脱氧核苷酸之间的键，具体说就是脱氧核糖和磷酸之间的磷酸二酯键．
（2）如果目的基因直接注入烟草细胞，一般会被烟草细胞核酸酶分解．质粒一般作为基因工程的运载体．
（3）切割后的目的基因与质粒由DNA连接酶连接成重组质粒．筛选导入重组质粒的细菌，应在其培养基中分别加入氨苄青霉素、四环素，添加青霉素的培养基中成活，四环素中不成活的为重组质粒．因为重组质粒带有抗氨苄青霉素基因，而四环素基因被破坏．
（4）从个体水平鉴定抗盐转基因烟草是否培育成功的方法是用一定浓度盐水浇灌或移栽到盐碱地中．
故答案为：
（1）salⅠ、HindⅢ酶    含抗盐基因的DNA和质粒进行切割    脱氧核糖    磷酸   
（2）核酸酶分解    运载体   
（3）DNA连接    分别加入氨苄青霉素、四环素    添加青霉素的培养基中成活，四环素中不成活的为重组质粒．因为重组质粒带有抗氨苄青霉素基因，而四环素基因被破坏   
（4）用一定浓度盐水浇灌或移栽到盐碱地中

点评 本题结合题图考查基因工程的相关知识，特别是基因表达载体的构建过程，要求考生明确该步骤需要限制酶和DNA连接酶，至于需要哪种或哪几种限制酶，需要考生分析题图，选择的限制酶要能切割含有目的基因的外源DNA分子和质粒，但不能破坏目的基因．

练习册系列答案
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