Question

【题目】已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，制备抗A蛋白抗体的部分流程如下图。

请回答：

（1）①代表的是______________过程。为获得A基因表达载体，需用__________酶对A基因和运载体进行切割。将A基因表达载体导入动物细胞常用的方法是___________________________。

（2）利用PCR技术扩增A基因时，设计引物序列的主要依据是___________，加入引物的作用是________。

（3）与体内DNA复制相比较，PCR反应要在一定的缓冲溶液中才能进行，并且要严格控制____________等条件。

（4）过程③采用的技术是________________。

Answer 1

【答案】 逆转录 限制酶 显微注射 A基因两端的部分核苷酸序列 与A基因单链相应互补序列结合，然后在DNA聚合酶作用下进行延伸 温度 动物细胞融合

【解析】试题分析：分析题图，图示为疫苗生产和抗体制备的流程之一，其中①表示逆转录过程；②是获取目的基因（A基因）的过程；③是细胞融合过程；X为杂交瘤细胞。

（1）由以上分可知①是逆转录过程。构建基因表达载体时，首先需要用同种限制酶切割含有目的基因的外源DNA和运载体，其次需要用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法。

（2）利用PCR技术扩增A基因时，根据A基因两端的部分核苷酸序列设计引物序列，加入引物的作用是与A基因单链相应互补序列结合，然后再DNA聚合酶作用下进行延伸。

（3）PCR扩增目的基因的过程：①高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开）；低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链．因此，与体内DNA复制相比较，PCR反应要在一定的缓冲溶液中才能进行，并且要严格控制温度等条件。

（4）根据图中信息可知X为杂交瘤细胞，则③过程需要采用动物细胞融合技术。