Question

13．如图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线．请回答：

（1）天然质粒需经改造才能作为基因工程的运载体，改造过程需要限制酶和DNA连接酶酶，经改造后的质粒同时具备的条件有①②③④（填序号）．
①标记基因　②一个至多个限制酶切割位点　③对受体细胞无害　④启动子　⑤起始密码子
（2）用图2中的人乳铁蛋白目的基因和图1所示的质粒构建重组质粒时，选用的限制酶是BamHⅠ/HindⅢ（从“EcoRⅠ”、“BamHⅠ/HindⅢ”、“SmaⅠ/HindⅢ”中选择）．
（3）图3中，①常用的导入方法是显微注射法．在利用大肠杆菌做受体细胞时，需要先用Ca²⁺处理，使之成为感受态细胞，有利于其吸收重组DNA分子．

Answer 1

分析 分析题图：图1是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的过程，该过程采用了基因工程技术（①目的基因的获取、②基因表达载体的构建、③将目的基因导入受体细胞、④目的基因的检测与表达）、动物细胞培养技术和胚胎移植技术．

解答 解：（1）天然质粒往往需经过改造才能作为基因工程中的运载体，改造过程需要限制酶和DNA连接酶；经改造后的质粒同时具备的条件有①标记基因、②多个限制酶切割位点、③对受体细胞无害和④启动子，而⑤起始密码子位于mRNA上．
（2）若选EcoRⅠ会破坏质粒的复制原点；若选SmaⅠ/HindⅢ，则构建的重组质粒没有标记基因或复制原点，所以用图2中的人乳铁蛋白目的基因和图1所示的质粒构建重组质粒时，选用的限制酶是BamHⅠ/HindⅢ．
（4）过程①是将目的基因导入动物受精卵，所用方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法，即先用Ca²⁺处理，使之成为感受态细胞，有利于其吸收重组DNA分子．
故答案为：
（1）限制酶和DNA连接酶   ①②③④
（2）BamHⅠ/HindⅢ
（3）显微注射法　感受态

点评 本题结合图表，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的操作工具及其特点；识记基因工程的操作步骤，掌握其应用，能根据图中和表中信息选择合适的限制酶，再结合所学的知识准确答题．