Question

为了测定某种分解纤维素的微生物生长所需要的最适pH，某同学设计了下列实验步骤：

①配制适宜的培养基，分别装到锥形瓶中，用缓冲液分别调pH为4.0、4.5、5.0、5.5、6.0，并分别标号为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ。　②将每瓶培养基等量分别装到5支试管中，加棉塞并包扎成5捆。　③将试管放到1个大烧杯中，在酒精灯上加热煮沸10 min灭菌，待温度冷却到50℃，将试管搁置斜面。　④在无菌条件下，往5组试管中接种等量的菌种。⑤25～28℃恒温箱中培养24 h。⑥测定每支试管中培养基的重量，记录并统计分析结果。

（1）上述步骤中有5处明显错误，请找出并加以改正。

（2）若按改正后的实验步骤，请将预测结果用曲线图表示走势。

Answer 1

答案：
解析：

（1）①缓冲液调的pH范围不对。多数细菌的最适宜pH在6.5～7.5之间，所以应将缓冲液分别调pH为6.0、6.5、7.0、7.5、8.0。②试管包扎成捆后没有做标记，这样就分不清培养基的不同。应该在每捆试管外挂上注明pH的标签。③培养基灭菌的方法不对。培养基应在100 kPa、121℃的高压蒸汽锅中保存15～20 min。④培养温度和时间不对，细菌应在30～37℃条件下培养1～2天。⑤不应测培养基重量，应测微生物的数目或菌体的重量。 （2）如答图（以菌体重量为例）： 点拨：本题主要考查了纤维素分解菌的分离过程中。（1）①细菌生长的适宜pH接近中性或微碱性，题中设立的PH范围在酸性范围内，不可取。②培养基分装完毕，灭菌之前要对分装后的试管进行标记，由于使用的试管数较多，避免混淆。③培养基的灭菌应用高压蒸汽灭菌。④细菌生长的温度范围一般是30～37℃，此温度下培养1～2 d才会长出菌落，24 h时间过短。⑤判断微生物的多少，不应直接称量培养基，而应测定微生物数目或称量菌体的重量，测定微生物的数量可用稀释涂布平板法或显微镜直接计数法等，也可直接称量菌体重量，此法操作简便。